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CHO 细胞无血清培养基 技术手册 2009 北京清大天一生物技术有限公司 BEIJING TSINGHUA SKYWING BIO TECH Co.,LTD. 2009 年 9 月 1 CHO 细胞 CHO细胞是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary，CHO)，1957年美国科 罗拉多大学Dr. Theodore T. Puck从一成年雌性仓鼠卵巢分离获得，为上皮贴壁型 细胞，是目前生物工程上广泛使用的细胞系。工业生产上应用较多的是CHO-K1 细胞，为转化细胞系，细胞染色体分布频率是2n ＝22 ，系亚二倍体细胞。ATCC 保存CHO-K1细胞株，编号为CCL-61，被广泛地用于重组DNA蛋白的表达。由 于该细胞存在遗传缺陷，无脯氨酸合成基因，不能将谷氨酸转变为谷氨酸-γ-半醛， 培养过程中需在培养基中添加L-脯氨酸才能生长。并且由于该细胞已经霍乱毒素 适应，形态学有所改变。最初细胞为贴壁型细胞，经多次传代筛选后，也可悬浮 生长。 ATCC提供的CHO-K1细胞照片 CHO 细胞容易发生基因突变，也较易进行基因转染，是良好的哺乳动物基因 表达宿主细胞，代表性细胞有二氢叶酸还原酶（dihydrofolate reductase ）营养缺 陷型突变细胞株（CHO/dhfr- ）、转染谷氨酰胺合成酶（Glutamine synthetase,GS ） 基因的 GS-CHO 细胞。 二氢叶酸还原酶是真核细胞核苷酸生物合成过程中起着重要作用的一种酶， 是常用的遗传选择标记之一，它可催化二氢叶酸还原成四氢叶酸。对于 dhfr 突 变体细胞而言，由于不能够合成四氢叶酸，阻断了正常核酸代谢途径，因此不能 在常规培养基上生长，但若在培养基中加入次黄嘌呤（hypoxanthine ）和胸苷 （thymidine ），则突变体细胞可以借助核苷酸的补救合成途径维持生长。利用 dhfr 基因进行筛选时，首先将重组 DNA 分子导入 dhfr- 表型的受体细胞，然后撤 除原培养基中的的次黄嘌呤和胸苷，即可获得 dhfr+ 并能表达外源基因的克隆细 胞系。因此在挑选表达外源基因的阳性克隆细胞时需选用不含次黄嘌呤和胸苷的 培养基。另外，氨甲喋呤（MTX ）选择压力可使CHO/dhfr- 细胞的外源基因的拷 贝数扩增并得到较高水平的表达。 CHO-GS 细胞是用含单抗蛋白等的目的基因和谷氨酰胺合成酶(GS)基因标记 的表达载体，转染宿主细胞 CHO ，再通过 L- 氨基亚砜蛋氨酸(methionine sulphoximine，MSX)等化合物选择加压促使 GS 基因和目的蛋白基因扩增，筛选 获得重组细胞株，可在不含谷氨酰胺培养基中生长、增殖，可避免或减少细胞代 谢过程中谷氨酰胺降解积累的氨对细胞的损伤、抑制作用。 - ATCC 提供的 CHO/dhfr 细胞照片 2 CHO 细胞表达系统的优势与特点 由于哺乳动物细胞结构、功能和基因表达调控的复杂性，外源基因在哺乳动 物细胞中的表达与在原核生物中的表达存在较大差异，因而外源基因在哺乳动物 细胞中高效表达所需的元件也不同于在原核生物细胞中的表达所需的元件。外源 基因在哺乳动物细胞中的表达包括基因的转录、mRNA 翻译及翻译后蛋白质的 加工等过程，如蛋白质的糖基化、磷酸化、寡聚体的形成以及蛋白质分子内或分 子间二硫键的形成等比较复杂，要表达具有生物学功能的蛋白质如膜蛋白、抗体 和具有特异性催化功能的酶需要在哺乳动物细胞中进行。 哺乳动物基因表达宿主细胞选择的基本原则是来源丰富、转化效率高、表达 效果好，CHO 细胞作为表达系统除具有上述的特点要求外，还有以下优势： 1）外源基因被整合到宿主染色体上后，在没有选择压力的情况下能稳定保持； 2 ）适合多种蛋白质的分泌表达和胞内表达，并且很少分泌自身的内源蛋白，便 于下游产物分离纯化； 3 ）对培养基的要求较低，可在无血清培养基中培养； 4 ）细胞可进行贴壁培养也可进行悬浮培养，且具有较高的