RNAi技术在园林植物遗传育种中的应用前景.pdfVIP

· d · 科技论坛 RNAi技术在园林植物遗传育种中的应用前景 刘 娜 (伊春职业学院，黑龙江 伊春 153000) 摘 要：RNA干扰技术(RNAinterference，简称 RNAi)是指将双链 RNAgl7(dsRNA)导入生物或细胞 内，引起与其同源的mRNA特异 性降解，因而抑制其相应基因表达的过程。它具有高效、快捷、特异性强等特点。本文从RNAi的发现、作用机制、作用特点和RNAi技术在 园林植物遗传育种中的应用前景等方面进行 了综述。 关键词：RNAi；作用机制；园林植物遗传育种 自1998年Fire等首次在线虫中发现并阐明以来，RNAi已经在 直接在细胞 内引人双链 RNA分子但还是造成了基因沉默。 其它动物 、植物和真菌中被证实。RNAi所具有的特异性、稳定性、高 3RNAi的作用特点 效、快速以及不改变基因组的遗传组成等特性为人们研究未知功能 通过对植物 (拟南芥)、动物(线虫和果蝇)等RNAi现象的研究 ， 的基因提供了新的反向遗传学手段。在拟南芥和水稻等基因组测序 不难发现RNAi作用具有以下重要特点：首先 ，RNAi具有高度的特 完成后，RNAi这一新技术在植物功能基因组学研究及植物的遗传 异性，只引起与dsRNA同源的mRNA降解。21～23个核苷酸中只要 改良等方面提供了一个强有力的手段，同时也为园林植物遗传育种 改变一个核苷酸 ，就可以使该 siRNA序列不对靶向mRNA起作用。 工作开辟了更为广阔的前景。 其次，RNAi抑制基因表达具有很高的效率，仅需少量的dsRNA就 1RNAi的发现 能有效抑制靶基因表达。Verma研究发现要达到相同的抑制连环蛋 早在 1990年，Napoli等把已知色素基因置于强启动子后，导人 白基因的 目的，反义寡核苷酸技术所需浓度为2 molL／，而 siRNA 紫色矮牵牛花中，试图加深矮牵牛花的颜色，结果却发现花的颜色 则仅需要 20nmol／L。 全部或部分变白。这就提示，导入的基因和牵牛花内源的着色基因 此外，RNAi具有系统性(或可传播性)，即siRNA可以在RNA依 都被抑制，相似的现象也在线虫中发现。1995年 ，康乃尔大学的Guo 赖性RNA聚合酶的作用下进行大量扩增，并转运出细胞 ，使 RNAi 等曾经尝试用反义RNA去阻断线虫的par一1基因表达，结果发现 扩散到整个机体并可以传代。 反义RNA的确能阻断 目的基因的表达，但作为对照的正义RNA， 4RNAi的应用及在园林植物育种中的应用前景 虽不能与活性RNA结合 ，也照样能引发抑制。1998年，Fire和 RNA干扰现象在生物体内普遍存在，且高度保守 ，被生物学家 Tabara首次将双链 RNA注入线虫，结果表现出比单独注入单链要 誉为生物体在基因组水平上的免疫系统。随着RNAi机制研究的不 强得多的沉默，并且导致子一代同源基因的沉默，这也是人们第一 断深入，RNA干扰作为一种高效的、序列特异的基因沉默，可在抗 次应用RNAi技术。事实上，即使每个细胞只注入几个分子的dsR— 病毒侵染、植物基因功能分析、基因组改 良、限制基因组内转座因子 NA也足以弓I起抑制。随后Hammond还发现，不仅在线虫中，在果蝇 的活动等方面发挥重要作用。 中也存在 dsRNA诱导的基因沉默，而且在它们的后代中依然表现 在老鼠、拟南芥、水稻和人等的基因组测序完成后，生物学研究 沉默，并将这种现象称为RNAi。 进入后基因组时代。人们研究的重点放在基因的功能注释，基因的 2RNAi的作用机制 表达调控及改造以及基因间的相互联系研究上。RNAi为大规模高 目前所认识到的RNAi的分子机制主要是通过对植物、真菌 、效及复杂的功能基因组学研究提供了一个便捷的平台。利用RNAi 动物等细胞的研究得到的。其可能的作用机制是：dsRNA被切割成 在水稻、芸薹属和油菜以及烟草上已经进行了一些基因功能验证的 21—25核苷酸的短干扰 RNA(siRN