家蚕JAB1CSN5蛋白的基因克隆表达及亚细胞定位.pdf

508 蚕业科学 CANYEKEXUE 2009；35(3) 家蚕JABl／CSN5蛋白的基因克隆表达及亚细胞定位 许 红1 姚 斐1 盛 清1 吕正兵1 陈 健1 聂作明1 王 丹1 刘立丽1 沈红丹1 舒建洪1 舒特俊1 陈剑清1 吴祥甫2 张耀洲1 (1浙江理工大学乍物化学研究所，浙江省家蚕生物反应器和生物医药蘑点实验摩，杭州310018； 2中国科学院上海牛命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，上海200031) 摘要JABl／CSN5是COP9信号复合体(constitutiveCSN)的第5个亚基，内嵌的 photomorphogenicsignalosome JAMM基序是CSN参与蛋白的泛素化降解途径并调控生物体生长发育过程的异构酶活性位点。在家蚕蛹cDNA 047 文库中筛选到的一条基因序列，其ORF长度为1 BmJM，于E．coliRosetta菌中进行原核表达，重组蛋白以包涵体形式存在。以纯化后的重组蛋白为抗原免疫大白兔 获得BnlJM的多克隆抗体，采用RT—PCR、Western blotting方法对BmJM基因在家蚕不同发育时期和组织中的转录 及蛋白表达水平进行分析，发现BrnJM蛋白在家蚕5龄幼虫的生殖腺表达量最高，而在其他组织中表达量较少，由 此初步揭示了JABI／CSN5在家蚕生长发育过程中的作用。亚细胞定位测定表明BHlJM蛋白在细胞质近核区域含 量最高，在细胞核中也有分布。 关键词 家蚕；COP9信号复合体；JABI／CSN5蛋白；基因克隆；序列分析；荧光定量PCR；亚细胞定位 文献标识码A 文章编号0257—4799(2009)03—0508—08 中图分类号$881．2；q78 SubcellularLocalizationof Gene and Cloning，Expression ProteinFrom mori JABl／CSN5 Silkworm．Bombyx JianlNIE XU YAOFeilSHENG CHEN Hon91 Qin91L()Zheng·Bin91 Zuo—Min91 WANGDanlLIULi—LilSHEN SHU SHUTe—Junl Hong—DanlJian—Hon91 CHEN WU ZHANGYao．Zhou” Jian．Qin91Xiang—Fu2 of Institute (1 Biochemistry，ZhejiangSci一殆∞University， ofSilkwormBioreactor ZhejiangProvincialKeyLaboratory 2 Instituteof andCell Institutesof Sciences， BiochemistryBiology，Shangh