干扰素与转铁蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达及鉴定.pdf

生物化学与生物物理进展 · Prog．Biochem．Biophys． ·625 干扰素与转铁蛋白融合蛋白 在毕赤酵母中的表达及鉴定 李晓静张豪 薛)中 李彦英 陈璨苗林方宏清’陈惠鹏‘ (军事医学科学院生物工程研究所，北京100071) 摘要 SepharoseFastF10w阳离子交换层析、 酵母Gsll5，得到的转化子经诱导表达后在发酵上清中均获得了表达．经SP Phenyl TFN样品．生物活性实验证明融合蛋白口FN—TFN具有抗病毒活性．铁饱和实验证明融合蛋白刀FN．TFN和单独的 TFN具有相同的铁结合能力．因而TFN可望作为刀FN的天然运输载体． 关键词转铁蛋白，干扰素一仅，毕赤酵母 学科分类号0812，R978．7 近年来在疾病的治疗过程中，为了提高药效减 融合基因和单独的TFN基因克隆至表达载体 轻毒副作用，药物的定向转运、定点释放和特异性 靶细胞治疗方案已引起人们极大的兴趣【”．人们正 在积极探索药物定向转运的可能性及其应用方案[2]． 一TFN构建成功．将重组载体经S∞I酶切后转化毕 最新研究表明，转铁蛋白一转铁蛋白受体介导的定 赤酵母GSl15，均获得了表达．经阳离子交换层析、 向药物转运系统已接近实用临床阶段，对肿瘤，脑 疏水层析纯化，获得了纯度大于93％的ⅢN—TFN 部中央神经系统疾病的治疗研究取得了令人振奋的 和纯度大于95％的ⅡN样品．生物活性实验证明 结果[3】．自1987年Anderson等首先得到人乳铁蛋白IFN—TFN具有抗病毒活性，铁饱和实验证明融合蛋 的晶体结构以来，已陆续得到一系列完整的转铁蛋 白中的TFN和单独的TFN均具有铁饱和特性，因 而TFN可望作为刀附的天然运输载体． 白及其片段的晶体结构．人转铁蛋白(仃ansf．errin， TF)是一个能够结合铁的单体糖蛋白，主要生理功 1材料与方法 能为结合、运输三价铁离子，控制体液中游离铁离 子浓度，提供可利用的铁和防止铁在血液中的沉 1．1材料 积．成熟的人转铁蛋白由679个氨基酸残基组成， 1．1．1基因、菌株及试剂．吲基因，含人转铁蛋 分子质量约80ku，可分为性质相似的两个结构域 白基因的质粒为本实验室保存．载体pPIC9，大肠 杆菌DH5仪及毕赤酵母GSll5菌株为本室保存． TFN(转铁蛋白N端半分子)和TFC(转铁蛋白C 端半分子)【4】．近年来，已有不少以转铁蛋白为天然 运输配体，使其结合一些活性多肽，形成一个具有 聚合酶为TaKaRa公司产品．质粒提取试剂盒购自 靶向功能的蛋白复合体，从而作为相应疾病靶向前 Promega公司，玻璃奶回收试剂盒购自美国Q． 药的成功报道M．在此基础上，亦可利用蛋白质工 FastFlow和 程技术将蛋白质药物基因偶联转铁蛋白基因生产蛋 Inaic公司．层析介质QSepharose 6Fast 白质复合物，在药物蛋白与转铁蛋白之间引入蛋白 PhenylSepharoseFlow购自Amersh锄公司． 酶切位点，当蛋白质复合物进入细胞后被蛋白酶酶 切，释放出药物蛋白而发挥作用阎． +通讯联系人．Tel：010．6694