纳微球粒径大小对免疫学效应的影响.pdfVIP

2010生物颗粒与粉体制备、应用技术研讨会 纳微球粒径大小对免疫学效应的影响 岳华”，魏炜，岳占国”，吕丕平‘”，王连艳8，马光辉a，·，苏志国a，· 8中国科学院过程工程研究所，北京，100190；b中国科学院研究生院，北京，100049 宰E-mail：ghma@home．ipe．ac．on；zgsu@home．ipe．ac．cn 关键词：粒径；纳微球；佐剂；抗原提呈细胞 摘要：目的：粒径大小是微观颗粒最重要的性质之一，本论文通过考察粒径大小对免疫 学效应的调节作用，期待能为纳微球佐剂的设计提供新的理念和思路。方法：采用SPG 膜乳化技术制备出不同粒径大小的壳聚糖纳微球作为颗粒模型，并选用专职抗原提呈细 比，纳米球可以被APCs快速的摄取，表现出最大的内吞数量及颗粒表面积。此外，颗 粒的胞内运输方式具有显著的粒径依赖性，纳米颗粒有助于提高溶酶体加工、酶解抗原 的能力，并且上调了利于抗原提呈，T细胞活化的细胞因子分泌水平。结论：具有较小 粒径的纳球在作为疫苗佐剂时更具有潜在的优势，值得后续工作更多的关注。 1．引言 作为疫苗投递载体，纳微球具有广阔的应用前景。但是如何设计与构建纳微球载体 使之发挥更好的佐剂效果，满足新型疫苗的发展需求是当前研究的重要难题。由于粒径 大小是颗粒最重要的性质之一，研究其对免疫学效果的影响，将为纳微球作为佐剂时提 供相应的理论指导，在治疗性疫苗及肿瘤免疫治疗研究方面也将具有重要意义。 2．材料与方法 2．1材料与试剂：微球制备材料(壳聚糖、PO．500、石油醚和液体石蜡、SPG疏水性玻 璃膜)、小鼠巨噬细胞株J774A．1以及细胞培养及生物学评价相关试剂。 2．2微球制各方法：采用SPG膜乳化技术，并结合乳液交联的方法，制备出粒径分别为 430nm、1．9 pm以及4．8肛m的尺寸均一的自发荧光壳聚糖纳微球颗粒。 2．3佐剂效果评价方法：以壳聚糖纳微球为模型颗粒，将其与APCs分别孵育特定时间， 考察粒径对细胞内吞能力、胞内运输、细胞因子表达或免疫分化类型的影响。 3．结果与讨论 3．1粒径大小对细胞内吞的影响 内吞实验表明，430nm的颗粒在1h内可以被APCs快速而有效地摄取，并具有最 大的内吞颗粒表面积，显示其优越的抗原吸附、运载能力。而1．9 pm,4．8pm的微球在 2030 4#％{々5n#Ⅻg、t月＆$矾}e 吞噬{【lJ始阶段具有明显的滞后期，与粒径较大的微球需要更多的触角去感知、包围，使 颗粒内吞需要较长的准备时间有关。另外，随着颗粒数量和粒径大小的不同，细胞呈现 出各种形态(图1)，揭示了变形作用在细胞内吞颗粒过程中的作用。 4Bum 0 10帅 罄1共聚焦照片Ⅱ示抗原提呈细胞在内#不同粒径的颗粒目笈生的女骺作用 32粒径大小对颗粒胞内运输方式的影响 通过考察粒径对胞内运输的影响，发现内吞颗粒的运输方式也具有显著的粒径依赖 9 性。只有粒径为430衄的颗粒与溶酶体高度共定位，而大粒径的微球(1um、48um) 都没有此种现象。对疫苗来说，外源性抗原只有在溶酶体中被加工提呈，才能够撤活相 应的体液免疫应菩，而纳米球的溶酶体降解运输方式，显示其作为疫苗佐剂的巨大潜力。 33粒径大小对细胞因子分泌水平的影响 APCs所分泌的细胞因子对免疫激活有极为重要的作用。结果表明，纳米球可以较 大程度地提高与T细胞活化相关的细胞因子水平。特别地，与微球相比，纳球有利于上 调T细胞共刺激因子CD80、CD86的分泌水平，下调与免疫抑制有关的细胞因子，并 更倾向于表达与Thl免疫应答相芙的因子(如IFN?、LL-12等)。 4．结论综上，我们成功地评价了粒径对佐剂效果的影响。与微球相比，纳球可以增加 APCs的摄取量，溶酶体途径可以使抗原更好的被加工提呈，并且上调了利于抗原提呈， Thl细胞活化的细胞因子分泌水平。因此，具有较小粒径的纳球在作