6 第六节 细胞学实验方法(二).pdfVIP

《组织细胞分子学 《组织细胞分子学 实验原理与方法》 实验原理与方法》 --国家级“十一五” 规划教材课程 --国家级“十一五” 规划教材课程 国国家家级级““十十一一五五”” 规规划划教教材材课课程程 --国家级“十一五” 规划教材课程 --国家级“十一五” 规划教材课程 国国家家级级““十十一一五五”” 规规划划教教材材课课程程 主讲：赵宗江 主讲：赵宗江 北京中医药大学 北京中医药大学 第六节 第六节 细胞学实验方法（二） 细胞学实验方法（二） 细胞培养实验 细胞培养实验 细细胞胞培培养养实实验验 优势和困难同在 优势和困难同在 优优势势和和困困难难同同在在 便捷、周期短、可以更直接揭示、 • 便捷、周期短、可以更直接揭示、 便便捷捷、、周周期期短短、、可可以以更更直直接接揭揭示示、、 说明的问题； 说明的问题； 说说明明的的问问题题；； 实验设计、技术平台、实验周期、 • 实验设计、技术平台、实验周期、 实实验验设设计计、、技技术术平平台台、、实实验验周周期期、、 所需资金； 所需资金； 所所需需资资金金；； 为何选择细胞实验 • 实验周期短，便捷 • 从另一个角度阐明问题 • 不同技术手段的验证 • 希望是纵向的揭示问题，而不是横向的 方法的堆砌 • 体内和体外是否一致（预期） 如何顺利进行细胞实验 • 基础的方法培训十分关键！细胞的特性，无菌 的观念 • 细胞的选择（无限细胞系，原代细胞），转染 • 技术平台，方法学的完善（细胞周期？ MTT？） MTT MMTTTT • 实验设计的合理（可行性，创新） • 资金 1.细胞培养方法 1.细胞培养方法 11..细细胞胞培培养养方方法法 细胞复苏：取冻存于液态氮中或-80 冰 细胞复苏：取冻存于液态氮中或-80 冰 • 细细胞胞复复苏苏：：取取冻冻存存于于液液态态氮氮中中或或--8800℃ 冰冰 箱中的细胞，迅速用双手揉搓至冰水状， 箱中的细胞，迅速用双手揉搓至冰水状， 箱箱中中的的细细胞胞，，迅迅速速用用双双手手揉揉搓搓至至冰冰水水状状，， 迅速如37 水浴箱中片刻。 迅速如37 水浴箱中片刻。 迅迅速速如如3377℃水水浴浴箱箱中中片片刻刻。。 移入超净台，吸入10ml离心管中1 min ， 移入超净台，吸入10ml离心管中1 min ， • 移移入入超超净净台台，，吸吸入入1100mmll离离心心管管中中11 mmiinn ，， 加DMEM 10ml，1000rpm，离心3min，弃上 加DMEM 10ml，1000rpm，离心3min，弃上 加加DDMMEEMM 1100mmll，rppmm，，离离心心33mmiinn，，弃弃上上 清液，重复1次，加10%FCS DMEM 2ml 清液，重复1次，加10%FCS DMEM 2ml 清清液液，，重重复复11次次，，加加1100%%FFCCSS DDMMEEMM 22mmll 平分于两5ml 细胞培养瓶中，置37 、 平分于两5ml 细胞培养瓶中，置37 、 • 平平分分于于两两55mmll 细细胞胞培培养养瓶瓶中中，，置置3377℃、、 5%CO 孵箱孵育72h。 5%CO 孵箱孵育72h。 55%%CCOO 孵孵箱箱孵孵育育7722hh。。