探讨细胞不同初始接种密度对转染效率de影响.pdfVIP

2011年6月第 18卷第 18期 论 著 晕}蜓 懈 辎 瓣瑚 O∞0∞O∞0∞0∞0∞0∞0∞0吣0 种的L2细胞 ，待生长24h后转染并细胞计数 。细胞计数结 于测试实验条件下基因的表达，而另一个报告基因作为内对 果为 ：4x10；2．9xl0s；1．6x10；10s．；8．4~140；7xl04；4．2x10；3．4x 照。在 DLR中，将萤火虫荧光素酶作为实验报告基 因，海肾 104。从数值可以看到不同初始密度的细胞经过大量分裂的 荧光素酶作为内对照报告基因。以提供实验报告基因测试的 指数生长期后 ，细胞密度有 明显的不同。 归一化。将实验报告基 因的活力与内对照报告基 因的活力作 2．2转染24h检测荧光素酶值 归一化可消除实验中不 同测试间所 固有的变化 ，这些变化减 如图2。从图2可以看出，校正后的荧光素酶活性值，细 弱实验准确度 ．其中包括培养细胞 的数 目及活力的差异 ，细 胞不同初始接种密度存在差异，随着浓度降低开始增高后降 胞转染及裂解的效率。相比用 CAT或 B一半乳糖苷酶对表达 低。每孔细胞接种数在 5x10时转染效率最高。笔者认为 ，转 数据作归一化，DLR有快速、方便、灵敏度高等优点。 染在细胞密度 中等适宜的细胞状态其转染效率最高。细胞过 流式细胞仪结果显示密度适宜 的细胞其转染效率高于 密接触抑制很明显；过稀脂质体对细胞也存在一定毒性，达 过密 的细胞状态 ；过稀的细胞其转染效率也不低 ，但结合镜 不到最高的转染效率。 下GFP绿色荧光蛋白观察和荧光素酶值测定值，笔者选择 了密度中等的细胞状态进行实验。稳定细胞数量和状态进行 转染实验 ，确保实验的重复性和可靠性 。 参【考文献】 [1lPHILIPL，Feigner,ThomasR，etal：Lipofeetion：Ahighlyefficient，lipid— mediatedDNA-transfectionprocedure[J]．ProcNatiAcadSciUS 1987，84 (1O)：7413-7417． I _．一．．。[2]JosephSandDavidW．RussellDNATransfeetionMediatedbyLipofection