菠萝蛋白酶的提取初级纯化及活性鉴定.pptVIP

菠萝蛋白酶的提取、初级纯化及活性鉴定  实验一 一、实验目的 系统地学习和掌握生命大分子物质分离纯化技术的原理及基本实验技术。 熟练掌握饱和硫酸铵沉淀法、透析法、测定蛋白质含量、蛋白酶活性检测等实验技术。 1、生命大分子物质分离纯化的一般程序： （1）选择有效成分含量丰富、稳定性好的样品材料。 （2）材料处理。 （3）确定分离纯化的方法，使粗品的纯度达到预定要求。 （4）建立灵敏、特异、精确的检测手段。 二、实验原理 2、蛋白质的分离纯化方法： (一)沉淀法 盐析法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法、聚乙二醇（PEG）沉淀法等。 在稀盐溶液中，蛋白质的溶解度随盐浓度的增加而升高，这种现象称为盐溶。 但当盐浓度增加到一定量时，其溶解度又逐渐下降，直到某一浓度时便从溶液中沉出，即为盐析。 一般进行蛋白质沉淀时，选用的盐是硫酸铵。 优点： ①溶解度大，对温度不敏感； ②分级效果好； ③有稳定蛋白质结构的作用； ④价格低廉。 缺点：盐浓度含量高。 (二)层析 主要有：离子交换层析，凝胶过滤，亲和层析 透析和超滤 透析是将待提纯的蛋白质溶液装在半透膜的透析袋里，扎紧袋口放在缓冲液中进行的。 超滤是利用压力和离心力，借助于超滤膜将不同分子量的物质分离的技术。 3、菠萝蛋白酶活性测定 酪蛋白 酪氨酸