PCRSSCP技术检测辐射诱发的恶转细胞p53突变.pdfVIP

980213.htm 中华放射医学与防护杂志 科技期刊 Chinese Journal of Radiological Medicine and Protection 1998年 第2期 No.2 1998 PCR-SSCP技术检测辐射诱发的 恶转细胞p53突变 赵永良　刘国廉　吴德昌　项晓琼 是否存在p53基因突变。方法　根据大鼠p53cDNA序列，合成4对引物分别覆盖大鼠p53 基因外显子5，6，7和8，利用聚合酶链反应-单链构象多态方法分析转化细胞中的p53 突变情况。结果　在转化细胞，p53基因外显子8的单链条带与正常细胞相比出现泳动 变位，经测序证实为265密码子G→C突变，使其编码氨基酸由精氨酸→脯氨酸。结论 　在α粒子诱发的恶性转化RTE细胞中存在p53基因突变，提示p53基因变异在辐射致 癌过程中可能起重要作用。 　　关键词　辐射　转化细胞　p53突变 Analysis of p53 mutations in radiation-induced transformed RTE cells by PCR-SSCP. Zhao Yongliang,Liu Guolian,Wu Dechang,et al.Institute of Radiation Medicine,Beijing 100850,China. Objective To determine whether the p53 gene has mutations in transformed RTE cells induced by α-particle irradiation.Methods Four pairs of oligonucleotide primers corresponding to exon 5-8 of rat p53 gene were synthesized.The PCR-single strand conformation polymorphism(SSCP) analysis was used to prescreen the p53 gene mutations. Results The single strand of exon 8 had mobility shift in polycrylamide nondenaturing gel in transformed RTE cells in contrast to normal cells.DNA sequencing proved the mutation to be G→C transversion at codon 265.Conclusions The mutation of p53 gene was found in transformed RTE cells,suggesting that the change of p53 gene might play an important role in radiation carcinogenesis. Key words Radiation Transformed cells p53 mutation 　　p53抑癌基因是目前肿瘤发生领域的研究热点，人类许多肿瘤如肺癌、膀胱癌、结 肠癌、肝癌等都涉及p53突变。在人类及哺乳类动物，相对应于外显子5，6，7和8的氨 基酸残基是高度保守的，而且大多数的突变位点都集中在这4个区段 ［1］ 。 ［2］ 　　在检测p53突变方法中，PCR-SSCP是近几年快速发展的一种方法 ，它快速、 灵敏而且一般无假阳性结果，可用于检测单碱基置换、数碱基插入或缺失等基因变 异。 　　流行病学调查资料证实氡及子体是肺癌发生的一个重要相关因素，但其致癌机理 尚不清楚。本实验利用α粒子诱发的恶转RTE细胞，对其p53基因高度保守区(外显子 5，6，7，8)进行了PCR-SSCP分析，以探讨p