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2014级研究生《细胞生物学实验技术》课程论文 （临床医学、口腔医学硕士专业学位） 临床医学消化内科专业 5班级 姓名 段厚羽 学号 148053023 总分 肝癌干细胞分离鉴定的研究进展 摘 要 肝癌是众多致命性的恶性肿瘤之一，随着肿瘤干细胞理论的提出，人们对肝脏肿瘤的发生发展以及转移有了新的认识!近年来，研究发现肝癌干细胞亦存在于肝癌细胞中，但对肝癌干细胞的起源、生物学标记及化疗药物产生耐药的机制等问题仍需要进一步的深入研究与探讨!尤其是肝癌干细胞的分离鉴定对治疗肝脏肿瘤及研究肝癌干细胞具有极其重要的意义。 关键词 肝细胞癌；肝癌干细胞；干细胞；肿瘤干细胞 前 言 尽管目前关于肿瘤干细胞的理论意见不一,但大量证据表明肿瘤干细胞是肿瘤发生、发展与维持的基础,与肿瘤的复发、转移和对治疗的抵抗有关。因此,把肿瘤干细胞作为研究抗肿瘤的真正靶标具有重要意义。为此我们就需要从肿瘤组织中分离鉴定出肿瘤干细胞,进一步研究这些细胞的特征,从而为靶向肿瘤干细胞的治疗提供基础,为肿瘤治疗开辟新的路径。相对于其他肿瘤干细胞的研究进展,目前肝癌干细胞( liver cancer stem cell)的研究进展缓慢,其中 最主要的就是如何分离和鉴定出肝癌干细胞, 肝癌干细胞的成功分离与纯化是研究肝癌靶向治疗的首要步骤。为此,分离和鉴定肝癌干细胞成为当前研究的热点。本文就有关肝癌干细胞的分离鉴定的研究进展做一综述。 1肿瘤干细胞的概念 近年来，肿瘤干细胞( cancer stem cell，CSC) 学说［1］备受关注。该学说并不是近几十年才提出的新概念，早在1867 年Julius Cohnheim 提出了肿瘤干细胞学说，但由于受到当时技术条件等的限制，未能分离出肿瘤干细胞，因而此学说在当时未获得重视［2］ 。它认为肿瘤细胞在成瘤性方面存在不均一性，其中只有极少数肿瘤干细胞具有诱发并维持肿瘤恶性表达的能力。肿瘤干细胞数目相对恒定，具有无限增殖、自我更新和多向分化的特性，有很强的迁移、浸润、转移能力。有研究表明肿瘤是一种干细胞疾病，肿瘤干细胞的比例与肿瘤的恶性程度呈正相关［3］。但肿瘤干细胞是否存在于所有肿瘤中仍有争议。肿瘤干细胞能不对称产生两种异质的细胞，一是与之性质相同的肿瘤干细胞；另一种是组成肿瘤，大部分的非致瘤癌细胞。AACR［4］（America Assosciation for Cancer Research）2006年给出的定义是：肿瘤中具有自我更新能力并能产生异质性肿瘤细胞的细胞。 2肿瘤干生物学及细胞生物学特性 肿瘤干细胞与干细胞相比1）相似的特性: ①都有无限的自我更新和分裂增殖能力; ②都具有多向分化的潜能;③具有相同的信号调节通路，如Bmi-1基因不仅是正常造血干细胞和神经干细胞自我更新所必须的基因，也是白血病细胞增殖所需要的基因; ④具有相似的细胞表面标志，如CD133、Msi-1、Sox2、ABCG2 /BCRP1 等。2）不完全相同的地方： ①正常干细胞具有自我稳定调控能力不会无限制生长，而肿瘤干细胞缺乏自稳能力。②肿瘤干细胞缺乏分化成熟的能力，缺乏自我更新信号转导途径的负反馈调节机制。③肿瘤干细胞倾向于累积复制的错误，而正常成体干细胞能够防止复制错误的发展。④肿瘤干细胞对染料Hoechst 33342 拒染。此外，肿瘤干细胞致瘤能力强，少量肿瘤干细胞( 少至500 个或1000 个) 就能在裸鼠体内形成肿瘤; 对多种化疗药物( 如阿霉素、氟尿嘧啶、环磷酰胺、依托泊苷及顺铂等) 有耐药性; 抗放疗; 有特异性表面标记分子( 如CD44 + CD24-，CD34+C38-等) ;有Wnt /β-catein、Notch、Hedgehog 和TGF-β等信号通路常异常活化 。 3 肿瘤干细胞的研究现状 肿瘤干细胞的分离和鉴定最初来源于血液系统恶性肿瘤。1997 年Bonnet 和Dick［5］首次确认了人类急性髓性白血病( acute myeloid leukemia，AML) 中存在肿瘤干细胞，并成功分离出来，首次在细胞水平上直观证实了肿瘤干细胞的存在。研究发现只有CD34+CD38-表型的细胞亚群有持续的克隆形成能力，占全部AML 细胞的0． 2%，将该种细胞接种至非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷( NOD/SCID) 小鼠后能形成AML。相比于血液系统肿瘤，实体瘤细胞较难分离和研究，主要有如下原因：①在肿瘤组织制成单细胞悬液的过程中，蛋白水解酶对细胞表面抗原的破坏等因素导致有生命力的单细胞悬液不易获得；②许多实体肿瘤的肿瘤干细胞标志蛋白尚未最终确定；③大多数流式细胞技术使用高压力下小孔径流主要用于分离血液成分，但这些条件却不适用于体积更大、质地更脆的许多实体肿瘤细胞的分离。虽然如此，一些