抗体酶的人源化.pptVIP

何谓抗体酶 应用中存在的问题 怎么解决 一 何谓抗体酶 抗体酶（Abzyme)： 或催化抗体（Catalytic antibody)是一种新型人工酶制剂，是一种具有催化功能的抗体分子，在其可变区赋予了酶的属性。它是利用现代生物学与化学的理论与技术交叉研究的成果，是抗体的高度选择性和酶的高效催化能力巧妙结合的产物。 抗体酶的催化反应 制备方法 抗体酶的研究，为人们提供了一条合理途径去设计适合于市场需要的蛋白质，即人为地设计制作酶。它是酶工程的一个全新领域。利用动物免疫系统产生抗体的高度专一性，可以得到一系列高度专一性的抗体酶，使抗体酶不断丰富。随之出现大量针对性强、药效高的药物。 抗原(antigen)抗体(antibody)的一般概念 抗原(antigen)： 一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答，并能与相应免疫应答产物(抗体或抗原受体)在体内外发生特异性结合的物质 抗体(antibody)： 能与相应抗原(表位)特异性结合的具有免疫功能的球蛋白 根据其化学结构和抗原的不同可分为IgG、IgM、IgA、IgE和IgD5种类型. 抗体结构 其中： 抗体分子的可变区（V区）决定了抗体同抗原结合的功能 抗体分子的稳定区（C区）决定了同种性免疫源性 二 存在的问题 1抗体酶的底物专一性、反应选择性和催化效率不如天然酶 2 抗体酶的存在率低，制备过程费时费事且价格昂贵 3具有一定抗原性，鼠源单抗用于人体时常被人免疫系统所识别,产生人抗鼠抗体 (HAMA) 三 怎么解决 思路：抗体酶的人源化 方法：1 嵌合抗体 2 表面重塑 3 重构抗体 4 链替换 1 嵌合抗体 在基因水平上将鼠源单 克隆抗体可变区和人抗 体恒定区连接起来并在 合适的宿主细胞中表达， 这种抗体称为人－鼠嵌 合抗体，但由于其整个V 区都是异源的,所以嵌合 抗体的异源性还很明显, 解决HAMA的效果并不理想 Morrison等从杂交瘤细胞中获得抗体V区cDNA，克隆到重组了人抗体C区的载体中，转化哺乳动物细胞表达出人鼠嵌合抗体。改造后的抗体保留了原单抗特异结合抗原的V区，去除了非人源序列(C区)；但由于其整个V区都是异源的，所以嵌合抗体的异源性还很明显，解决HAMA的效果并不理想。嵌合抗体完整地保留了异源单抗的V区，最大限度地保持了其亲和活性，可作进一步改造的亲和力参照体，也是进一步提高补体活化及细胞毒作用等的基础对照。 2 表面重塑 通常认为,抗原上的抗原决定簇应具残基的运动和溶剂的可及性,多集中在抗原表面,因此可推测异源抗体在人体内引起免疫反应的主要抗原决定簇应是该抗体的表面上溶液可及的残基。 因此，可以将鼠单抗可变区表面暴露的骨架区氨基酸残基中改成人源的，就成为了镶面抗体。 该方法的原则是仅替换与人抗体表面可及残基(SAR)差别明显的区域,在维持抗体活并兼顾减少异源性基础上选用与人抗体表面残基相似的氨基酸替换;另外,所替换的区段不应过多,对于影响侧链大小、电荷、疏水性,或可能形成氢键从而影响到抗体互补决定区(CDR)构象的残基尽量不替换。免疫球蛋白Fv区中表面可及残基(SAR)通常是指30%氨基酸暴露在溶液中的区段。 3 重构抗体 　重构抗体是由异源抗体中与抗原结合相关的残基与人抗体重新拼接构建的。 4 链替换 实验发现一些抗体中轻、重链V区在结 合抗原中起的作用不同,对于作用较弱的链 进行链替换,同样可以获得高亲和力的抗体。 抗体酶的人源化 酰基转移反应 重排反应 氧化还原反应 金属螯和合反应 磷酸酯水解反应 磷酸酯闭环反应 光诱导反应 光聚合反应（二聚作用） 光裂解反应 诱导法 引入法 拷贝法 抗原结合位点的重构 FR重构 CDR移植 部分CDR移植 SDR转移 FR的选择 FR改造 一致化法 最佳同源法 回复突变 与噬菌体展示技术相结合的FR回复突变 完善抗体生物学活性的相关FR改造 两步设计法