3DNA 的生物合成.ppt

DNA是由四种脱氧核糖核酸所组成的长链大分子，是遗传信息的携带者。 生物体的遗传信息就贮存在DNA的四种脱氧核糖核酸的排列顺序中。 DNA dependent DNA polymerase——DDDP DNA dependent RNA polymerase——DDRP RNA dependent RNA polymerase——RDRP RNA dependent DNA polymerase——RDDP 一、 DNA复制的特点 1、半保留复制 （1）定义： DNA在复制时，以亲代DNA的每一股作模板，合成完全相同的两个双链子代DNA，每个子代DNA中都含有一股亲代DNA链，这种现象称为DNA的半保留复制(semi-conservative replication)。 ①1958年Meselson和Stahl的实验： 该实验首先将大肠杆菌在含15N的培养基中培养约十五代，使其DNA中的碱基氮均转变为15N。将大肠杆菌移至只含14N的培养基中同步培养一代、二代、三代。分别提取DNA，作密度梯度离心，可得到下列结果： 2、DNA的半不连续复制 由于DNA聚合酶只能以5→3方向聚合子代DNA链，即模板DNA链的方向必须为3→5。因此，分别以两条亲代DNA链作为模板聚合子代DNA链时的方式是不同的。 以3→5方向的亲代DNA链作模板的子代链在复制时基本上是连续进行的，其子代链的聚合方向为5→3，这一条链被称为领头链(leading strand)。而以5→3方向的亲代DNA链为模板的子代链在复制时则是不连续的，其链的聚合方向也是5→3，这条链被称为随从链(lagging strand)。 由于亲代DNA双链在复制时是逐步解开的，因此，随从链的合成也是一段一段的。DNA在复制时，由随从链所形成的一些子代DNA短链称为冈崎片段(Okazaki fragment)。 冈崎片段的大小，在原核生物中约为1000～2000个核苷酸，而在真核生物中约为100个核苷酸。 证据 脉冲标记（pulse－labeling experiment） 追踪实验（pulse－chase experiment） 3、复制起始点、复制子、复制方向 DNA在复制时，需在特定的位点起始，这是一些具有特 定核苷酸排列顺序的片段，即复制起始点。 结构特点：回文结构(palindrome);富含AT,“呼吸作用”十分明显，许多酶的结合位点；真核生物的复制原点约300 bp 。 在原核生物中，复制起始通常为一个，而在真核生物 中则为多个。 复制叉移动方向的确定 4、需要引物(Primer) 二、参与DNA复制的物质 3、DNA聚合酶 (DDDP) 以dNTP为前体催化合成DNA 需要模板和引物的存在 不能起始合成新的DNA链 催化dNTP加到生长中的DNA链的3‘-OH末端 催化DNA合成的方向是5→3 DNA聚合酶 不能催化两个游离的dNTP在DNA模板上聚合 需要具3’-OH的引物 引物最后要被DNA聚合酶Ⅰ除去，缺口由该酶补满，再由连接酶连接 RNA聚合酶 能催化两个游离的NTP在DNA模板上聚合 提供3’-OH （2）原核生物的DNA聚合酶 DNA聚合酶有三种 具有多种酶活性的多功能酶 参与DNA复制的主要是polⅢ和polⅠ。 5’-3’聚合酶活性 模板 引物-3’OH DNA聚合酶的校对功能 5→3外切酶活性 从5’-P端依次切除，可连续切除 只切配对的5’-P末端核苷酸 既可切除脱氧核苷酸也可切除核苷酸 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅱ(DNApolⅡ) MW为120KD 100个酶分子/每个细胞 聚合作用:只有DNApolⅠ的5% 3→5外切酶活性 无5→3外切酶活性。 对作用底物的选择性较强， 不是复制的主要聚合酶，在DNA修复中起一定作用 pol Ⅲ由十种共22个亚基组成，是真正负责大肠杆菌DNA合成的复制酶（replicase） α亚基具有5’→3’聚合DNA的酶活性 ε亚基具有3’→5’外切酶的活性，校对功能 θ亚基具有促进ε亚基外切酶的活性，控制复制真实性 ?亚基决定了Pol III全酶的持续合成能力 DNA聚合酶Ⅲ全酶（DNA Polymerase Ⅲ holoenzyme） 10种不同亚基组成 θαε τ γ2 δ δ’ χψ DNA聚合酶Ⅲ※ β(4个) DNA聚合酶Ⅲ全酶 大肠杆菌三种DNA聚合酶比较 在真核生物中，目前发现的DNA聚合酶有五种，分别命名为DNA聚合酶α（pol α），DNA聚合酶β（pol β），DNA聚合酶γ（pol γ），DNA聚合酶δ（pol δ），DNA聚合酶ε（pol ε）。 真核细胞