第七章微生物生长和环境.pptVIP

一、获得纯培养的方法 根据所要分离的菌种的特性选用培养基： ①分离真菌用马丁培养基，pH偏酸；分离放线菌用高氏1号，pH中性偏碱。 ②根据不同菌对化学试剂的敏感性：分离放线菌，培养基中加10%酚，抑制细菌、真菌；从土壤中分离真菌，加孟加拉红，抑制细菌生长。 ③根据分离对象的营养特征：分离能发酵纤维素的菌株，培养基以纤维素为唯一碳源。分离固氮菌，用无氮培养基。 二、细菌群体生长的测定 高等生物：生长：个体体积的增大 繁殖：个体数量的增加。 对于丝状微生物如放线菌、霉菌： 生长：菌丝伸长、分枝。 繁殖：产生孢子，孢子萌发为菌丝体。 对于细菌、酵母等单细胞微生物来说，个体增大是有限度的，测定单个细胞生长没有大的意义。微生物生长主要是指群体数量的增加，微生物的生长通过繁殖表现出来。 微生物生长是群体生长: 表现为细胞数量的增加和生物量的增长 !!! （一）细胞数量的测定 细胞总数的测定（包括活的和已丧失活力的细菌，又名直接计数法） 1、显微直接计数法 2、比浊法 3、染色涂片计数法 活菌数量的测定（间接计数法） 1、稀释平板测数法 2、最大概率法（MPN法） 3、薄膜过滤计数法 （二）细胞生物量的测定 测定细胞干重法 单位体积培养物中细胞物质的干重 含氮量测定法 微生物细胞中蛋白质的含量是比较稳定的，测出微生物细胞中的含N量后再换算出蛋白质的含量，可用凯氏定N法 。 蛋白质的含量=氮量×6.25 DNA含量的测定 ATP含量的测定 代谢活性法 根据微生物生命活动的强度来估算生物量。如单位体积培养物在单位时间内的O2消耗、糖消耗或产酸产CO2量等，它们在一定程度上间接地反映细胞生物量。 在对数生长期内，细菌数目的增加是按指数级数增加的，即 20 →2 1 →22 →23 ……2n 这里的指数 n 为细菌分裂的次数或者增殖的代数，也就是一个细菌繁殖n代产生2n 个细菌 如果在对数期开始时间 t1的菌数为 x1，繁殖 n 代后到对数期后期t2的菌数为 x2，则x2 = x1· 2n 例如：在一细菌培养液中第一次测得的细菌数为 104 /ml，经过培养 4 h后，又测得菌液中的细菌数为 108 /ml，求此菌的世代时间和在此时间内繁殖的代数 根据公式：G = [t2 - t1] / [3.3 · lg (x2 /x1)] t2 - t1 = （4 - 0）× 60 min = 240 min x2 = 108 x1 = 104 lg (x2 / x1 ) = lg108 ~ lg104 = 8 - 4 = 4 G = 240 / (3.3 × 4) = 240/13.2 = 18 min 即在上述培养液中，世代时间为 18 min 代数 n = (t2 - t1) / G = 240 / 18 = 13.3 稳定期的细胞内开始积累贮藏物，如肝糖、异染颗粒、脂肪粒等，大多数芽胞细菌也在此阶段形成芽胞。如果为了获得大量菌体，就应在此阶段收获，因这时细胞总数量最高 也是发酵过程积累代谢产物的重要阶段，某些放线菌抗生素的大量形成也在此时期 稳定期的微生物，在数量上达到了最高水平，产物的积累也达到了高峰，此时，菌体的总产量与所消耗的营养物质之间存在着一定关系，这种关系生产上称为产量常数 细菌死亡率逐渐增加，群体中活菌数目急剧下降，出现了“负生长”。其中有一段时间，活菌数呈几何级数下降，故有人称之为“对数死亡阶段” 细胞有的开始自溶，产生或释放出一些产物，如氨基酸、转化酶、外肽酶或抗生素等。菌体细胞也呈现多种形态，有时产生畸形，细胞大小悬殊，有的细胞内多液泡，革兰氏染色反应的阳性菌变成阴性反应等 不是所有细胞均处于完全相同的生理状态，因此，在细菌生长的整个周期，细菌数和培养时间，往往是一条缓慢上升以后又逐渐下降的曲线 认识和掌握细菌生长曲线，对发酵生产的指导意义： 计算生长速率和代时 不同生长期的细胞在结构和生理上有很大差别，了解生长曲线，就能根据需要进取样和收获 不同的生长期理化因子对微生物的影响可能不同。对数生长期的细胞较为一致，因此常用于研究细胞的新陈代谢 不断调节流速而使细菌培养物浊度保持恒定的连续培养叫恒浊连续培养 由光电装置检测培养容器中的浊度，根据浊度变化控制新鲜培养液流入