壶瓶枣褐斑病的病原鉴定和防治的研究.pdfVIP

摘 要 壶瓶枣褐斑病为近年来山西壶瓶枣发生的一种严重的果实病害，在田间发病初期 主要在枣果的果顶或果肩部位出现红色的病斑，病斑凹陷，后期变为红褐色，病斑的 边缘清晰，除病斑外的其他部位的果肉既不腐烂也不变色。该病严重发生时可使果实 发病率高达50% 以上，给红枣的产量和品质造成很大影响。本实验通过分离病原菌， 用形态学和分子生物学方法对病菌进行了鉴定，并筛选出对病菌有抑制作用的拮抗菌 和化学药剂，为此病害的田间防治奠定了基础，主要研究结果如下： 1 病原菌的分离和鉴定 以壶瓶枣病果为材料，分离了30 个枣果的 150 个病组织块，分离获得 135 个菌 株，根据菌落特征发现各菌株没有明显差异，为同一种类型的真菌。通过室内和田间 致病性测定以及人工接种后再分离，证明编号为CN535 的真菌菌株为该病的致病菌。 该病菌在PDA 上培养7 d 菌落直径达69.2～73.5 mm，基内菌丝和气生菌丝均发达， 具明显的浅灰与墨绿色的同心轮纹；分生孢子单生或短链生，具纵横隔膜和短喙，大 小为22.5～40.0×8.0～13.5 µm，为典型的Alternaria 属真菌特征。在PDA 和PCA 培 养基上进行产孢培养，结果发现在细长分生孢子梗的上部形成特征性的具短分枝的孢 子链，支链一般长1～5 个孢子，似小树丛状，为A. alternata 的特征。其rDNA-ITS 序列分析结果表明该菌与A. alternata 、A. tenuissima 、A. longipes 、A. mali 和A. citri 的同源性均为100%。用两对链格孢菌的特异性引物AAF2/AAR3 和Aalt-F/Aalt-R 分 别扩增出相对应的341 bp 和450 bp 的片段。综合形态特征和分子分析结果，确定壶 瓶枣褐斑病的病原菌为A. alternata (Fries)Keissler 。 2 内生菌的分离和拮抗菌的室内筛选 在PDA 、KB 和NA 三种培养基上分离枣果的内生菌，纯化后，根据形态将其确 定为同一种菌，在KB 上菌落呈黄绿色，边缘平滑。从土壤中直接分离和筛选拮抗菌， 共得到 16 个菌株，经过测定这些菌株对病原菌的菌丝生长均无明显的抑制作用。从 经过高温预处理的土壤中分离拮抗菌的比例比常温下从土壤中分离拮抗菌的比例高， 但是并不呈正比关系。同时得到 4 个抑菌率 90.0% 以上的菌株和 11 个抑菌率在 80.0%～90.0%之间的菌株。生防细菌中CHA0r、WCS358::phl 和SB 对病原菌菌丝生 长抑制率分别达到54.7%、51.2%和46.5% 。CHA0r、ZN 和WCS358::phl 的抑菌圈直 径分别达到14.3 mm、12.7 mm 和12.7 mm，抑菌圈效果明显。生防链霉菌中龟裂链 霉菌和武夷菌素链霉菌对菌丝生长抑制率分别达到58.0%和67.3%，抑菌圈直径分别 达到30.0 mm 和25.3 mm ，抑制作用均较明显。而菌株CN120 和CN121 对褐斑病菌 菌丝生长不但没有抑制作用，反而促使其菌落生长。 3 化学药剂防治壶瓶枣褐斑病 选用9 种常见的杀菌剂室内测定对壶瓶枣褐斑病菌Alternaria alternata 的毒力。 采用生长速率抑制法和悬滴法分别测定了 9 种杀菌剂对该病菌的菌丝生长和孢子萌 发的抑制作用，并测定了其中6 种杀菌剂对该病菌的毒力。同时在室内测定了6 种药 剂对病原菌的防治效果，将室内防效好的药剂用于田间防效测定。结果表明，异菌脲、 代森锰锌、施力科、剑斑和多菌灵对病菌菌丝生长抑制作用较强，抑菌率均达到90.0% 以上；代森锰锌、剑斑、多菌灵、炭阻绝和施力科对病菌孢子萌发抑制活性比较强， 抑菌率也达到85.0% 以上。毒力测定结果表明，异菌脲、炭阻绝、施力科、多菌灵、 剑斑和代森锰锌的有效中浓度(EC50)分别为0.2 ，11.1，14.5，20.8 ，28.5 和149.9 mg/L， 其中异菌脲的有效中浓度最低，相对抑制效果最好；施力科和多菌灵次之；代森锰锌 最差。室内防效测定，发现施力科、剑斑、代森锰锌和异菌脲的防效较好，而炭阻绝 和多菌灵的防效较差。6 种药剂的相关系数均在0.90 以上，表明药剂浓度与抑制作用 呈现较高的正相关。田间防效测定结果表明，异菌脲的田间防治效果最好，防效达到 72.9% ，施力科和剑