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ABIStepOne型荧光定量PCR仪标准操作规程.doc
StepOne?型荧光定量PCR仪
操作规程:
StepOne?上机可由两种方式来进行:由StepOne Software Quick Start进行上机或由StepOne? 机器面板直接触控上机。
由StepOne Software Quick Start进行上机:
开启StepOne Software v2.0 进入主画面后点选 Quick Start 窗口进行快速上机设定。进入Experiment Properties后输入:Experiment Name及档案储存位置;选择Experiment Type选择使用荧光系统;选择Ramp Speed选择实验样品种类;点选Run Method确定PCR 反应条件是否需要修改后,按下START RUN。
如欲使用StepOne?机器上VeriFlex Block的功能,请由左方Setup功能列上点Plate Stepup窗口,在“Assign Targets and Samples”窗口下,勾选Enable VeriFlex Block选项,此时Block即被分成六个区块。
接着点选Run Method,在run program上点一下欲调整的温度步骤,选择“Set different temperatures for one or more zones”并设定每个区块的温度(两相邻区块温度差异不可以超过5度,第一和第六区块最多可差异25度)。
按下Start Run Now进行data 收集,反应结束后,则会回到 “Main Menu”画面,触控Collect Result将data 存出。
由StepOne? 机器面板直接触控上机:
开启电源后,进入主画面,由触控式屏幕来进行StepOne? 的设定。
按下TaqMan cDNA(Standard)进入PCR Thermal Cycle Program,可利用下面工具列再重新编辑反应条件,如果条件相同则直接按下Save。
如欲使用StepOne?机型上VeriFlex Block的功能,请点选Options下的VeriFlex step并设定每个区块温度,请注意两相邻区块温度差异不可以超过5度以上,第一和第六区块最多可差异25度。
触控需要更改之处则会跳出触控式键盘,重新给予实验名称、选择档案储存的Folder、并更改实际反应样品体积,按下Save Exit;然后在Browse Last Accessed Experiments 下选择刚设定好的实验,按下Start Run。此时跳出警告标示,提醒之前的档案是否存出,如果已经将前一个档案存出,则可直接触控Overwrite进行Data收集;如未储存,则触控Collect将Data存出。
确定反应体积及实验名称无误后,触控Start Run Now,则会进入PCR Program实时显示画面。反应结束后,则会回到“Main Menu”画面,触控Collect Results将data 存出后,再回到StepOne Software 进行实验盘建立及分析。
清洁与维护保养:
外壳要用柔软的布配合温和的清洁液清洗,不要用酒精或其他洗涤用品;加热孔可以用酒精棉球擦洗,但在清洗前应注意加热板的温度需降至室温。
注意保持热盖和Block的清洁,特别注意不能将带有荧光染料的试剂溅洒在热盖或者Block里,否则需用蘸有70%酒精(纯酒精稀释在蒸馏水里)的干净棉球擦洗,直到不影响实验结果。
注意事项:
为避免触电事故,仪器的输入电源线必须可靠接地。
操作人员不得擅自打开仪器,元件的更换或机内调节须由持证的专业人员进行。
在连接交流电源前,需保证电源电压与仪器要求电压一致(允许偏差±10%),并确保电源插座的额定负载不小于仪器要求。
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