PDGFRβ抑制剂细胞筛选模型的构建及应用.pdfVIP

维普资讯 · 688 · 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBulletin 2008May；24(5)：688～9l ◇实验方法学◇ PDGFR—I3}抑制剂细胞筛选模型的构建及应用 付 水 ，山 松 ，刘孝荣 ，李志斌 ，吕建新 ，鲁先平 ，宁志强 ，王小宁 (1．温州医学院检验医学院，浙江 温州 325035；2．深圳微芯生物科技有限公司，广东深圳 518057) 中国图书分类号：R329．2；R329．24；R345．57；R392．11； 肿瘤内血管生成，促进肿瘤生长。PDGFR．B是肿瘤血管内 R394．2；R965．1 皮细胞的分子标志之一，在肿瘤新生血管内皮细胞中高表 文献标识码：A 文章编号：1001—1978(2008)05-0688—04 达，并与某些肿瘤的生长、转移及预后密切相关 。由于 摘要：目的 建立针对以血小板衍生生长因子受体 B·(plate· PDGFR．B是一个较为理想 的肿瘤靶 向治疗靶标 ，因此针对 let．derivedgrowthfactorreceptor．B，PDGFR．p)为靶标的特异 其小分子抗肿瘤药物的研发成为热点。尽管一些具有PDG- 及灵敏的细胞模型体系，用于酪氨酸激酶受体 (receptortyro· FR．B抑制活性的小分子药物已相继上市，但它们同时还具 sinekinase，RTK)抑制剂的筛选和研究。方法 构建人的 有一些抑制其它 RTK活性的毒副反应。因此，研发对 RTK PDGFR．B真核表达载体 pcDNA3．1P·DGFR—p，将其转染至 酶谱具有不同选择性的新型小分子化合物，进而开发出具有 NIH3T3细胞，获得稳定转染的细胞克隆，并对其进行功能 良好疗效、毒副作用小的新型 RTK抑制剂，已成为国际上抗 学鉴定及应用；应用瞬时转染 PDGFR-B的HeLa细胞，建立 肿瘤靶向治疗药物的研发趋势。 构建简便、快捷、特异性强、针对性强的细胞药物筛选模 PDGF依赖性的受体磷酸化细胞模型。结果 在无血清培 养条件下，稳定转染人 PDGFR·B的NIH3T3细胞获得了 型，是开发新型RTK抑制剂的重要前提之一。本实验将人 PDGF依赖性的细胞增殖特征 ；HeLa细胞经瞬时转染 PDG· PDGFR．B基因转染至小鼠NIH3T3细胞株 中，得到稳定转 染克隆细胞，它们在无血清培养基中呈现明显的PDGF浓度 FR．B后，可以检测出明显的PDGF依赖性的受体酪氨酸磷 依赖性增殖／存活特征。PDGFR—B基因也被瞬时转染至内 酸化。通过应用已知PDGFR．B抑制剂及 自行合成化合物 ， 源性表达很低的人 HeLa细胞株中，表达的PDGFR．B蛋 白显 确证了以上细胞模型具有机制针对性特征。结论 所构建 示出明显的PDGF依赖性磷酸化现象。以上细胞模型应用 并确证的细胞模型具有特异性和灵敏性 ，适用于较高通量的 于RTK抑制剂的筛选和研究中，表现出良好的模型特征 ，现 PDGFR．B和其它RTK抑制化合物的体外筛选与研究。