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植物生理学实验操作指南 植物生理实验室 2011，3 实验一 淀粉酶的提取及作用 原理： 1.淀粉 淀粉酶水解 蓝色糊精 红色糊精 无色糊精 麦芽糖 葡萄糖 ? 2.葡萄糖+斐林试剂 Cu2O↓(砖红色） 植物材料与实验器具： 植物材料： 萌动的小麦 实验器具： 试管 ；玻棒；量筒；研钵；漏斗；电炉；水浴锅 试 剂： 2%淀粉溶液；稀I-KI 溶液（原液稀释5倍）；斐林试剂 ? 操作步骤： 1. 取10粒萌动的小麦种子放入研钵中， 用量筒取10ml蒸馏水作为淀粉酶提取液总量（包括研钵清洗、种子研磨），分三次加入，将小麦研成浆状，用脱脂棉过滤于试管中,摇匀。 滤液静置5-10min ,上清液为淀粉酶的提取液。 操作步骤： 2. 取2只刻度试管做标记A管、B管 A管：2ml 2%淀粉液+2ml蒸馏水 38℃ B管：2ml 2%淀粉液+2ml淀粉酶提取液 20min 加I-KI 2~3滴 观察并比较两管颜色变化。  3.B管+3ml 斐林试剂 沸水浴 2~5min 观察颜色变化 作业：1.记录观察结果并作必要的分析。 实验二 植物组织水势的测定 原理： 根据渗透作用的原理，用小液滴法测得蔗糖溶液与植物组织中之间的等渗浓度，根据公式 Ψ W (细胞水势) =Ψ s = — CRT 求得溶液的水势，从而得知植物组织的水势。 材料与实验器具： 植物材料：女贞叶片 实验器具：细滴管；试管及指形管；烧杯；镊子、剪刀；移液管；标签纸 试 剂：1 mol/L蔗糖溶液；甲烯蓝溶液 操作步骤： 1.用短滴管吸取1M蔗糖溶液取0.5ml、 1ml、 2ml、 3ml 、4ml 分别放入10ml 刻度试管中，加蒸馏水至10ml，盖上塞子上下倒转混匀，配成0.05M、0.1M、0.2M、0.3M、0.4M的糖液。 操作步骤： 2.用移液管从浓度各试管中吸出1ml注入对应的指形管内，各管均加塞，并贴上标签。 操作步骤： 3.将女贞叶片在叠在一起，沿中脉两边用钻孔器打取10片小圆片，分别放入小指形管内，放置20min(期间摇动2~3次）后，加甲烯蓝2滴摇匀。 操作步骤： 4.用长滴管吸取着色溶液放入原相应的蔗糖溶液中，慢慢放出一滴蓝色溶液，在白色纸片上观察小液滴升降情况，并作记录。 作业： 1.记录小液流在试管内的移动方向 作业： 2.按下列公式计算组织的水势： Ψ W (细胞水势) =Ψ s = — CRT 式中：Ψ s —— 溶液的渗透势，以 MPa 为单位。 R ——气体常数，为 0.008314 MPa·L/（mol·K ）。 T ——绝对温度，即 273 + t ℃, 单位为K。 C ——溶液的摩尔浓度，以 mol/L 为单位。 思考题： 1.用小液流法测定植物组织水势时，为什么应强调所用试管、毛吸管应保持干燥 2.打取小圆片并投入试管中时动作应迅速，加入甲烯蓝不能太多？ 实验三 叶绿素含量的测定 原理： 根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比 。 叶绿素在652nm(混合）、663nm、645nm有最大吸收峰。 根据在分光光度计下测定的吸光度，求得叶绿素的含量。 材料与实验器具： 植物材料： 女贞、海桐叶片实验器具： 分光光度计；电子天平； 研钵； 试管； 小漏斗；滤纸； 吸水纸； 移液管 ；量筒； 剪刀 试 剂： 95％乙醇（或80％丙酮）；石英砂；碳酸钙粉 操作步骤： 1.称取剪碎的新鲜样品0.1g 左右，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及3～5ml 95％乙醇，研成均浆，继续研磨至组织变白。静置3～5min。 操作步骤： 2. 取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到10ml试管中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。 操作步骤： 3.用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至10 ml ，摇匀。 操作步骤： 4. 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95％乙醇为空白，在波长663nm、645nm下或652nm测定吸光度。 操作步骤： 5. 计算公式： 叶绿素的含量（mg/g）= [(O.D652/34.5)×提取液体积×稀释倍数