白藜芦醇抗白血病效应及其机制实验研究.pdfVIP

白藜芦醇抗白血病效应及其机制的实验研究 华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所 博士研究生 刘新月 导 师 邹萍教授 第一部分 白藜芦醇抑制白血病细胞生长的作用及其机制 目的 观察白藜芦醇(Res)对白血病细胞生长增殖、细胞周期及凋亡的影响， 为其作为抗白血病药物的应用提供理论和实验依据。 培养基于37C，5％C0：培养箱培养，隔日换液传代，实验选取细胞活性均在98％ 以上。采集正常健康成人外周静脉血，以淋巴细胞分离液进行密度梯度离心获得 外周血单个核细胞(PBMNC)，培养于上述培养基。MTT法检测不同浓度Res 作用于K562细胞、NPBMNC后细胞的增殖抑制率，并进行比较。 亡的影响。 结果(1)细胞培养各组之间K562细胞抑制率与Res浓度及培养时间呈正相关 增殖可能具有选择性作用。(2)随着Res浓度的增加，K562细胞周期发生变化， 细胞周期被阻滞于S期，G2／M期细胞比例减少。(3)Res能够诱导K562细胞凋 亡。 结论Res可显著抑制白血病细胞的生长，其作用呈浓度和时间依赖性；诱导白 血病细胞周期停滞及凋亡是Res抑制白血病细胞生长的机制；Res对正常人 PBMNC生长无明显抑制作用，而选择性作用于白血病细胞。 关键词 白藜芦醇；白血病细胞；细胞增殖；细胞周期；凋亡 第二部分白藜芦醇对白血病细胞RAS系统的影响及意义 目的 观察白血病患者体内肾素水平的变化，同时在体外观察血管紧张素 讨肾素一血管紧张素系统(RAS)在白血病发生发展中的作用及Res抗白血病的 机制。 方法采集30例急慢性白血病患者骨髓和外周血，以7例血小板减少性紫癜患 者作为正常对照，放免法检测标本中的肾素浓度。体外试验以人髓性白血病细胞 箱培养，隔日换液传代，实验选取细胞活性均在98％以上。MTT法检测不同浓 度AnglI作用于K562细胞后增殖抑制率。同样采用上述培养的K562细胞，以 100、200 培养上清液中AnglI含量的影响。 结果(1)急性白血病患者骨髓组织中肾素浓度显著增高，与正常对照组相比有 显著性差异(P值均O．05)；ilii慢性髓细胞白血病患者骨髓组织中肾素浓度虽高 于正常对照，但无显著性差异(P=O．562)。8例急性白血病患者同时检测了骨髓 细胞具有促进增殖的效应，在一定范围内与浓度时间成正比。(3)Res作用48 小时后细胞上清液中血管紧张素II(AngII)含量明显降低。 结论急性白血病患者骨髓局部存在RAS的异常；K562细胞系中存在AnglI的 自分泌途径，AnglI对K562细胞增殖具有促进作用；Res可以剂量依赖方式抑 关。提示Res有可能通过抑制AnglI的生成而抑制白血病细胞增殖。 关键词 白血病；RAS；AngII；白蓼芦醇 第三部分 白藜芦醇对白血病血管新生的抑制作用及机制 目的 体外研究Res对内皮细胞增殖的作用以及Res对白血病细胞血管内皮细 胞生长因子的影响。探讨Res抗白血病血管新生的作用及机制。 方法以体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和白血病U937细胞系为研究 对象，分离人脐静脉内皮细胞。接种于预先包被1％明胶的25cm2塑料培养瓶中， 待其长成完全融合状单层细胞。Ⅷ因子SABC法鉴定其为内皮细胞，取3～6代细 胞用于实验。用体外小管形成实验观察不同浓度的Res对HUVEC微血管形成的 影响。U937细胞培养方法同前一部分，用ELISA法检测白藜芦醇对U937细胞上 清中VEGF水平的影响。 结果(1)当接种在基质胶上时，正常HUVECs可形成完整的管状结构，加入Res 后，细胞上清液中VEGF含量与空白对照比较，表达量显著减低(P0．05)，表明Res 能抑匍]U937细胞分泌VEGF，且与Res浓度成正比。 结论Res在体外能明显抑制HuⅦcs微血管的形成，表明Res具备抗血管新生 的作用；白血病细胞存在VEGF的自分泌，Res能,显著抑制u937白血病细胞分泌 VEGF，提示是其抑制血管新生的机制之一。 ／ 关键词 白孝g芦醇；白啦病；血管新生；VEGF 7 The fortheAnti·leukemiaeffectsof Study resveratrol