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表达人C04分子的小鼠白血病细胞系的建立
及其细胞周期研究
华中科技大学同济医学院
硕士研究生：曾惠
硕士生导师：胡俊斌教授
中文摘要
近年来分子生物学发展迅速，基因转染已经广泛用于多种实验方法和治疗
方法中。为了让小鼠白血病细胞表达特定抗原分子作为肿瘤特异性抗原(TSA)，
我们选用逆转录病毒载体将目的基因转入靶细胞。本项实验工作，共分为两部分。
实验一表达人CD4基因的逆转录病毒载体的构建
目的构建高效稳定表达人CD4(hCD4)基因的逆转录病毒载体，使hCD4分子
能稳定持久表达于靶细胞。
方法利用PCR技术大量扩增hCD4cDNA的目的基因，并引入酶切位点中，
用连接酶将目的基因与载体pLXIN相连接，随后转入感受态大肠杆菌进行扩增，
PCR鉴定出正确转染的阳性菌落，经酶切及测序证实hCD4目的基因己经成功转
包装细胞，经药物筛选出抗性克隆并扩增建系，收集含病毒颗粒的上清液以感染
靶细胞。
结果PCR菌落鉴定及酶切鉴定显示hCD4基因成功地插入pLXIN载体中，
可以抵抗G418生长，将抗性细胞克隆挑出培养，得到稳定产生病毒颗粒的PT67
细胞(为hCD4一PT67细胞)。
结论本实验成功构建了能表达hCD4基因的重组质粒pLXIN—hCD4。
实验二表达人CD4分子的L615细胞的获得及其细胞周期研究
目的研究hCD4一PT67细胞产生的病毒颗粒感染小鼠T淋巴细胞白血病细胞
以及该细胞的细胞周期。
选出感染成功的细胞，扩增后利用流式细胞仪检测L615一hCD4细胞表达hCD4分
子的情况。并用PI—FCM法检测L615细胞和L615一hCD4细胞的细胞周期。
细胞与L615细胞相比，两者的细胞周期无特异性差异。
结论本实验获得了稳定表达TSA(hCD4)的白血病细胞，其细胞周期与亲代
细胞无差异。
关键词人CD4分子：逆转录病毒载体；L615细胞：细胞周期
_【 Establishmentofamouseleukemiacellline human
expressing
CD4and ofitscell
} study cycle
Medical
Departmentofhematology,UnionHospital，TongjiCollege，Huazhong
of
Scienceand
University Technology
Hui
Postgraduate：Zeng
Tutor：Prof．HuJunbin
Abstract
hasachieved has
Recently，molecular transfection
biology greatprogress．Gene
been usedin fieldsof and obtainstableand
widely many experimentstherap
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