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第二十章 细胞工程 1．细胞培养：1962年开始，用于生物医学研究，生产酶制剂，生长因子，疫苗，单抗等； 2．细胞融合：单克隆抗体技术，被誉为免疫学中的革命； 3. 细胞拆合； 4. 哺乳动物胚胎培养和胚胎移植； 5．转基因技术：转基因动物；转基因植物； 6．哺乳动物克隆技术：动物克隆；细胞克隆。 一、植物细胞工程 植物细胞工程：以植物细胞为基本单位在离体条件下进行培养、繁殖和人为操作，改变细胞的某些生物学特性，从而改良品种，加快繁育植物个体或获得有用物质的过程。 植物细胞工程所涉及的范围和内容相当广泛，包括:植物细胞培养、原生质体培养、原生质体融合、染色体工程和植物细胞遗传工程等。 （一）植物细胞培养 植物细胞培养：在离体条件下，将愈伤组织或其他易分散的组织置于液体培养基中进行培养，得到分散成游离的悬浮细胞，通过继代培养使细胞增殖，从而获得大量的细胞群体的一种技术。 植物细胞培养的应用： 1、获得再生植株 2、消除病害 可从感染病毒的植物中获得无菌苗。如对感染马铃薯病毒X的马铃薯进行茎尖和节间外植体培养，从茎尖愈伤组织中得到的植株大约40%无马铃薯病毒X。 3、种质的长期保存 4、合成次生代谢物-包括药用代谢物、食品添加剂、杀虫剂、杀菌剂等 如罂粟的海洛因（麻醉） （二）原生质体培养 原生质体的优点： 1、无细胞壁，有利于利用实验手段进行细胞杂交、细胞器移植和大分子的引入，可以方便地进行遗传操作。 2、原生质体适合进行诱导融合形成杂种细胞，因此原生质体的分离和培养是获得胞质杂种和植物育种的有效手段。 （三）原生质体融合 原生质体融合可克服有性杂交的不亲和性和使叶绿体、线粒体等细胞质基因组合在一起。如通过原生质体融合可得到一些种间杂种，多数能开花结实，并得到后代。 （四）染色体工程 按照一定的设计，有计划地消减、添加或置换同种或异种染色体，从而达到定向改变遗传性和选育新品种的一种技术。如渐渗系的获得。 （五）植物细胞遗传工程 植物细胞遗传工程：在人工控制条件下，用载体把外源的遗传物质运送到植物细胞中去，然后培养植物细胞，使之成为完整的植株，并开花结实，使获得的基因能够表达并遗传下去。是细胞工程和基因工程相结合的新兴领域。 内容具体包括以下几个方面： 1、分离制备特定基因 2、将目的基因与载体连接 3、将重组DNA引入受体细胞，使之复制、转录、表达，从而获得所要求的生物制品或生物体。 二、动物细胞工程 动物细胞工程：以动物细胞为基本单位在离体条件下进行培养、繁殖或人工操作，使细胞产生某些人们所需要的生物学特性，从而改良品质，加速繁殖动物个体，获得有品系的过程。 动物细胞工程所涉及的主要技术：细胞培养、细胞融合、胚胎工程、转基因动物技术、细胞拆合、克隆技术、干细胞技术等。 （一）动物细胞培养 动物细胞培养：将动物细胞或组织分散成单个细胞， 模拟机体内的生长环境，使其在体外环境继续生长繁殖的过程。 （二）杂交瘤技术和单克隆抗体 1975年英国科学家Milstein和Kohler将产生抗体 的淋巴细胞同肿瘤细胞融合，成功建立了单克隆抗 体技术，而获得1984年诺贝尔医学和生理学奖。 每个B淋巴细胞仅专一地产生、分泌一种针对某 种抗原决定簇的特异性抗体，而肿瘤细胞可以无限 增殖，因此杂交瘤细胞可在体外培养或移植到体内 条件下分泌大量单克隆抗体。 单克隆抗体技术的最主要优点是可以用不纯的抗原分子大量制备纯一的单克隆抗体。 (三)胚胎工程 胚胎工程：主要是对哺乳动物的胚胎进行某种人为的工程技术操作，然后让其继续发育，获得人们所需要的成体动物。其中胚胎培养和胚胎移植是胚胎工程的基础（P521）。 （四）转基因技术 转基因技术：把已知基因转移到真核细胞，并整合到基因组中得到稳定表达的技术，它是改变物种遗传性状的根本途径，是20世纪80年代初兴起的一项生物高技术。 常用的几种技术： a.基因的克隆和重组技术 b.外源基因的导入 c.外源基因整合与表达的检测 （五）细胞拆合 细胞拆合：把细胞核与细胞质分离开来，然后把不同来源的细胞质和细胞核相互配合，形成核质杂交细胞。 根据使用方法的不同细胞拆合分为两种类型： （1）物理法：微玻璃针或微吸管去除或移入卵母细胞的细胞核；紫外线或激光把细胞核破坏掉。 （2）化学法：细胞松弛素B（破坏微丝的作用）处理，并结合离心技术，将细胞拆分为核体（karyoplast）或称小细胞（minicell）和胞质体（cytoplast） （六）哺乳动物克隆技术 动物克