高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF3基因的原核表达.pdfVIP

动物医学进展。2010，31(8)：8-11 in Medicine ProgressVeterinary 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF3基因的原核表达 徐明明1’2，刘永刚2，王淑杰2，武嘉男2，石文达2，李丽琴2，荣福龙1”，蔡雪辉孙 (1．东北农业大学，黑龙江哈尔滨150001；2．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨150001) 摘 GenBank中已发表的高致病性PRRSVHuN4株ORF3基因序列，设计合成扩增PRRSVORF3基因的引 物。将扩增的基因克隆到表达载体pProExHTb中，转化到大肠埃希茵BL21进行表达。Westernblot分 析表明，GP3蛋白在大肠埃希茵中获得正确表达，且具有良好的反应活性。将纯化的GP3蛋白免疫小鼠制 体，证明PRRSVGP3蛋白具有良好的抗原性。 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒；ORF3蛋白；原核表达；抗原性 中图分类号：$852．659．6；$858．28 文献标识码：A 大肠埃希菌表达HP-PRRSVHuN4株GP3，为进一 猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinereproductive and virus，PRRSV)属于尼多病 respiratorysyndrome 步研究GP3的结构、功能及免疫学特性奠定基础。 毒目(Nidovirales)、动脉炎病毒科(Arteriviridae)、动 1材料与方法 脉炎病毒属(Arterivirus)，能引起猪繁殖与呼吸综合 1．1材料 征(PRRS)，俗称“猪蓝耳病”。临床表现为母猪晚期 1．1．1 HuN4 病毒、茵株、质粒和血清PRRSV 流产、早产、死胎、木乃伊胎等繁殖障碍和各年龄猪群 株、感受态细胞JMl09、感受态细胞BL21、载体质粒 的呼吸道症状。该病于1996年在我国有发生的报 pProExHTb，均由猪病综合防治组保存；PRRSV 道[1]，因为没有有效的防控手段，成为养猪业难以解 HuN4株猪阳性血清由哈尔滨兽医研究所猪病综合 决的问题。尤其是2006年高致病性猪蓝耳病的暴 防治组制备并保存。 发，流行范围广，传播速度快，持续时间长，病死数量 1．1．2主要试剂限制性核酸内切酶(BarnHI和 多，给我国的养猪业带来了巨大的经济损失，经研究 EcoR I)、T4 证实高致病性PRRSV(HP．PRRSV)变异株是引起该 盒、DNA 病的主要病原之一【2]。PRRSV基因组为不分节段的 盒，均购自宝生物工程(大连)有限公司；HRP标记 单股正链RNA，全长约15kb，包括9个开放阅读框。 的兔抗猪IgG，购自Sigma-Aldrich公司。 根据血清型和遗传特性的差异，可将PRRSV划分为 两个基因型即欧洲型和美洲型。 1．2 方法