高致病性禽流感病毒广谱嵌合抗体的构建表达及活性研究.pdfVIP

V01．49 第49卷第6期 厦门大学学报(自然科学版) No．6 ofXiamen Nov．2010 2010年11月 Journal University(NaturalScience) 高致病性禽流感病毒广谱嵌合抗体的构建 表达及活性研究 夏 琳1’2，罗文新¨，吴 君1，刘彦宁1，傅雅娟1， 陈毅歆1，陈鸿霖1，金鑫2，夏宁邵1 (1．厦门大学国家传染病诊断试剂及疫苗工程技术研究中心。生命科学学院， 2．厦门大学医学院。福建厦f-j361005) 摘要：高致病性禽流感病毒高度变异且缺乏有效的治疗药物．在前期研究工作中，本课题组发现一株鼠源广谱中和单 抗13D4，在动物实验中显示出对H5N1禽流感病毒具有广谱治疗效果．在本研究中，从分泌13D4单克隆抗体的杂交瘤 构建人一鼠嵌合抗体．筛选出稳定表达嵌合抗体的CH0细胞株，从培养上清中纯化出嵌合抗体．竞争Elisa结果表明，嵌 合抗体与鼠源单抗能够识别同一个抗原表位并具有相似的亲和力．血凝抑制反应和中和活性测定结果证明，13D4嵌合 抗体保留了对不同亚型H5N1病毒的广谱反应性，并且对两株H5N1病毒具有中和活性．本研究获得的13D4嵌合抗体 将具有潜在的治疗价值． 关键词：H5N1；嵌合抗体；广谱活性 中图分类号：Q511 文献标识码：A 文章编号：0438—0479(2010)06—0845—05 大部分禽流感病毒只会引起人体的微弱感染[1]， 研究者们的目标[8]，并试图将该类单抗人源化后用于 1997年首次在香港出现的高致病性禽流感H5N1病人类的感染治疗，避免鼠源单抗的免疫原性带来的副 毒则例外，它具有显著的广谱宿主范围，在小型大型猫 作用‘9。． 科、啮齿类、灵长类动物等许多野生动物及家禽中引起 我们已报道了一组广谱交叉反应的H5特异性抗 体，其中13D4为最有效的鼠源保护性抗体．动物实验 致命性疾病[2]．H5NI病毒的持续感染使人类感染致 死率超过了60％[3]．M2离子通道抑制剂与神经氨酸 酶抑制剂为病毒有效的预防制剂，但并不能作为有效 的治疗药物H]． 研究中，我们将构建表达13D4嵌合抗体，旨在大幅度 由于抗体介导的主动免疫反应能够阻挡病毒与靶 减弱鼠源单抗的免疫原性、延长抗体在体内的半衰期， 细胞结合而成为感染的治疗方法之一．1918年“西班为治疗性抗体的研究和抵御高致病性禽流感H5N1 牙流感”中输入康复病人的血清减少了50％的致死 对人类的危害奠定基础． 率[5]，近来严重的H5N1病人从康复者的血清中也成 功获得了免疫能力[6]．已有报道证明鼠源及人源单克 1材料与方法 隆抗体对H5N1病毒感染前后的动物具有保护效 果[引．针对病毒的高度变异性，筛选特异识别H5N11．1 材 料 病毒抗原保守表位的广谱交叉中和性单克隆抗体成为 本研究中所用的大肠杆菌DH5a为实验室保存； Flp—InTM及表达细胞株Flp-In 收稿日期：2010—04+29 基金项目：国家自然科学青年基金资助项目，教育部科 DNA聚 Invitrogen公司；各种限制性内切酶、LA—Taq 学技术研究重点项目(108157)}国家传染病重大专项