临床执业医师诊断基础免疫检测样本制备辅导.pdfVIP

2012 2012 临床医师《诊断基础》辅导 免疫检测样本制备 流式细胞仪测定的标本，不论是外周血细胞、培养细胞或组织来源细胞，首先要保证是 单细胞悬液，对不同来源的细胞制备成单细胞悬液有不同的处理程序。 ( ) ( ) ((一))外周血淋巴细胞样品的制备 血和骨髓：天然单细胞悬液。当有血凝块时，应用50μm尼龙网过滤，同时进行细胞计 数和血涂片以判断靶细胞群体是否仍然存在。一般采取密度梯度离心法。 ( ) ( ) ((二))培养细胞的样品制备 贴壁生长的单层细胞需要用蛋白酶消化后用机械法分离。 ( ) ( ) ((三))新鲜实体组织单细胞悬液的制备 一般采取机械法、酶处理法、化学试剂处理法和表面活性剂处理法等方法。分离不仅是 要获得最大产量的单细胞悬液，还要尽量保证细胞结构的完整性和 抗原性。大多数淋巴样 组织可用轻柔的机械方法快速分离，并保持收获细胞的相对完整。某些组织由于细胞间连接 紧密，需在机械分离的基础上用蛋白水解酶如胰蛋 白酶、胃蛋白酶。骨髓标本亦可能因骨 细胞成分污染而需要酶消化。但使用酶法一定要确认酶的使用没有改变、减弱靶抗原的表达， 细胞活性没有显著降低。 (四)单细胞悬液的保存 常用的处理方法有三种： 1.深低温保存法。 2.乙醇或甲醇保存法。 3.甲醛或多聚甲醛固定法。 抗碱血红蛋白测定 「参考值」 正常成人抗碱血红蛋白2%以下。抗碱血红蛋白随年龄而有变化。 不同年龄的抗碱血红蛋白。 年龄抗碱血红蛋白(%) 早产儿81.71±1.94(70.6～91.4) 足月儿69.79±1.47(45～89) 新生儿68.39±2.06(48.4～92.8) 1～3月35.74±4.11(7.49～81.7) 4～6月8.08±1.34(2.43～39.4) 7～12月3.39±0.29(1.37～7.8) 1～3岁2.58±0.15(1.02～4.73) 4～6岁1.81±0.12(0.9～3.18) 7～11岁0.81±0.06(0.4～1.7) 12～16岁0.93±0.06(0.4～1.5) 「临床意义」 重型β海洋性贫血HbF 浓度显著升高，该试验中可达30%～90%，轻型海洋性贫血HbF 可在轻度增高，该试验一般在2%～5%，有的也可正 常，α海洋性贫血(HbH)的HbF 在正常 执业医师网校培训：/kcnet1960/ 免费试听入口/ManageCheck.asp?adsid=479UnionID=521 范围内，但该试验测定结果略高，因为HbBart′s 也具有抗碱性。F(δβ)海洋性贫血、A2F 海 洋性贫血和 γβ海洋性贫血的HbF 均有较明显升高，δ海洋性贫血的HbF 正常，此外遗传性 球形红细胞增多症，再生障碍性贫血，白血病、恶性贫血、骨髓转移癌等HbF 也可有轻度 增高。杂合子遗传性胎儿血红蛋白持续存在综合征的HbF 在15%以上，纯合子者100%但都 没有明显的症状和血液形态学改变。 感染性休克诊断 严重感染特别是革兰氏阴性细菌感染常可引起感染性休克。感染性休克(septic shock)， 亦称脓毒性休克，是指由微生物及其毒素等产物所 引起的脓毒病综合征(sepsis syndrome) 伴休克。感染灶中的微生物及其毒素、胞壁产物等侵入血循环，激活宿主的各种细胞和体液 系统;产生细 胞因子和内源性介质，作用于机体各种器官、系统，影响其灌注，导致组织细 胞缺血缺氧、代谢紊乱、功能障碍，甚至多器官功能衰竭。这一危重综合征即为感染性 休 克。因此感染性休克是微生物因子和机体防御机制相互作用的结果，微生物的毒力数量以及 机体的内环境与应答是决定感染性休克的发展的重要因素。 对易于并休克的一些感染性疾病患者应密切观察病情变化，下列征象的出现预示休克发 生的可能;体温过高(40.5℃)或过低 (36℃);非神经系统感染而出现神志改变，如表情淡漠 或烦躁不安;呼吸回忆伴低氧血下和(或)血浆乳酸浓度增高，而胸部X 线摄片无异常表现;心 率增快、与体温升高不平行，或出现心律失常;心率增快、体温升高不平行，或出现心律失 常;尿量减少(0.5ml/kg)，至少1h 以上，血 压12kPa(90mmHg)或姿位性低血压，血象示血 小板和白细胞(主要为中性粒细胞)减少;不明原因的肝、