交联酶晶体的性能及其在有机合成中的应用.pdfVIP

维普资讯 一 有机化学 YOUJI HUAXUE，1999，19，242～248 综述与进展 交联酶 晶体 的性能及其在有机合成 中的应用 01~35e 李祖义 朱 伟 (中国科学院盲i 化学研囊面一 2ooo32) 摘要 交联酶晶体提供了酶(高活性，高选择性，易处理，犀应条件温和)及固相催化剂(环境适应性大，能循环 ． 利用)的复合特征 。它在稳定性 ，活性 ，机械强度方面均有突出的优势。交联酶 晶体在有机台成 中非常有用 ，如在 手性化台物拆分 ，肽合成，及碳 一碳键的形成等方面有着 比较成功的应用。 关键词 苎， 堂 1前言 催乜『副 娥 酶晶体 交联酶晶体 (cross—linkedenzymecrystals，CLEC)是指通过交联剂，主要是戊二醛 ，将在水溶液 中生成的均匀的酶晶体交联形成的一种具有稳定结构和酶催化活性的晶态物质。交联酶晶体既具 有酶 (高活性 ，高选择性 ，易处理 ，反应条件温和)特征 ，又具固相催化剂 (环境适应性大，能循环利 用)的优点 ，使得交联酶晶体催化剂在有机合成中非常有用。 相 比于小分子晶体 已广泛地用作工业原料和催化剂，大分子如酶那样的晶体则很少应用。这 是由于蛋 白质 晶体大量制备 的困难，蛋 白质晶体的脆性 ，及对反应速率减小的错误理解…。1992 年，St．Clair和 Navia两人证实了嗜热菌蛋 白酶的交联酶晶体即使在苛刻的条件下仍能保持催化活 性一2．这使得酶晶体在有机合成上的利用引起 了人们的注意。现在 ，已有 15种酶被制成交联酶晶 体的形式 ．5种交联酶 晶体 (Candidarugosa和 Pesudomonaseepacia所产的脂肪酶，嗜热菌蛋 白 酶 ，枯草杆菌蛋 白酶 ，青霉素酰化酶)已进行公斤级生产，并被 AltusBiologies公司商品化。 2 交联酶 晶体的性能 交联酶晶体在稳定性 ，活性，机械强度方面均有突出的优势。 2．1 稳定性 相 对于可溶酶 ，交联酶晶体技术产生的催化剂对因热，有机溶剂和蛋 白质水解造成的变性作用 具有增 强的稳定性 (表 1)。 交联酶晶体的稳定性可能是物质晶态属性的结果 ，也有酶分子共价交联的因素。在晶格里 ，蛋 白质浓度接近理论限度 ，大量的蛋 白质 一蛋 白质交联出现。当一个蛋 白质从溶液里转移到晶体环 境 中时[，静 电力和蛋 白质分子间疏水作用增大，能显著地提高蛋白质的抗热稳定性及对其它变性 剂 的稳定性[，从而阻止伸展，聚集或分解 。另外，因晶体中溶剂通道的尺寸和严格的蛋 白质 一 蛋 白质相互作用的关系，使得蛋 白水解酶被排除在晶格之外，从而增强了交联酶晶体催化剂抗蛋 白 水解的稳定性 。晶体结构对于交联酶晶体的稳定性是绝对需要的。交联可溶的嗜热菌蛋 白酶及其 沉淀剂 ，均因缺少晶体结构 ，并不显示 比溶解态酶更高的稳定性。而分子间的交联对于晶体结构又 是必要 的 。 1997—07—21收稿 ，1998—02—10修回= 维普资讯 第 3期 李祖义等：交联酶晶体的性能及其在有机合成 中的应用 通过戊二醛及其它交联剂l7造成的蛋 白质分子 内交联可 以导致额外的蛋 白质热稳定性，阻止 伸展。戊二醛稳定交联酶晶体是因为在水溶液中，戊 二醛形成具有不同长度和结构的寡聚体的混 合物[8，9]这样 ，一个晶体能选择最适宜的交联种类[。。 表 1 在各种条件下不同交联酶晶体的稳定性 Tab．1 StabilityofCLEC ofenzymesundervariousconditions 2．2 活性 在交联酶晶体中，三个主要因素为晶体大小 ，底物大小及酶的构象，控制着晶体的酶活性。 往 ．在晶态酶的实际利用中，低底物浓度时，底物的扩散效应是个严重的问题_1。值得注意 的是作为催化 目的