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westernblotzb第三部分.ppt
Western blot 实验技术 Western Blot基本原理 在电场的作用下将电泳分离的多肽从凝胶转移至一种固相支持体，然后用这种多肽的特异抗体来检测。 一、实验原理 Western Blot法又称免疫印迹法（IBT），分三个阶段进行。 第一阶段：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）。 第二阶段：电转移。 第三阶段：固相酶免疫测定。 * * 张 蓓 三、固相酶免疫测定检测ENA自身抗体 （一）原理 （二）材料 1、洗涤液：含0.05％吐温-20的pH7.4的PBS 2、酶标抗人IgG 3、阴性对照血清、阳性对照血清 4、底物溶液 5、终止液 6、恒温摇床、微量加样器、反应槽、塑料袋、 滴管、吸管等。 （三 ）方法 1．次日取出已封闭的NC膜，用洗涤液漂洗5次，每次1min。 2. 将剪下条带放入反应槽中，加入1ml洗涤液，再已加入20μl血清混匀，37℃恒温摇动40min。 3．取出洗涤液漂洗5次，每次1min。 4．加入1ml酶标羊抗人IgG，37℃恒温摇动30min。 5．取出洗涤液漂洗5次，每次1min。 6．加入底物液1ml，显色10min。 7．加入终止液终止反应。 * * *
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