生物技术下游.doc

老师上课所说的重点，仅供参考。大家还是要看看课件的！！！！ 1、板框过滤机的操作是间歇式的，每个操作循环由装合、过滤、洗涤、卸渣、整理五个阶段。 1)、装合： 将板与框按 1-2-3-2-1-2-3的顺序，滤板的两侧表面放上滤布，然后用手动的或机动的压紧装置固定，使板与框紧密接触。 2、细胞破碎（cell rupture）技术是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁，使细胞内物质包括目的产物成分释放出来的技术。 3、细胞破碎方法及其原理 （1）机械破碎→通过机械运动产生的剪切力，使组织、细胞破碎。捣碎法、 研磨法、匀浆法、超声法 （2）物理破碎→通过各种物理因素的作用，使组织、细胞的外层结构破坏，而使细胞破碎。温度差破碎法、压力差破碎法 （3）化学破碎→通过各种化学试剂对细胞膜的作用，而使细胞破碎 有机溶剂：、表面活性剂：、酸碱 （4）酶促破碎→通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用，使细胞外层结构受到破坏，而达到细胞破碎 自溶法、外加酶制剂法 4、机械破碎法又可分为 高压匀浆破碎法（homogenization） 高速珠研磨破碎法（bead grinding） 超声波破碎法（ultrasonication） 5、非机械法 酶溶破碎法（enzyme lysis） 化学破碎法（chemical treatment） 去垢剂破碎法（detergents） 渗透压冲击破碎法（osmotic shock） 冻融破碎法（freezing and thawing） 其中酶法和化学法溶胞应用最广。 6、 物理法 渗透压冲击法 冻结-融化法 干燥法 7、包涵体：一种蛋白质不溶性聚集体，包括目标蛋白、菌体蛋白等。目标蛋白一级结构是正确的，但立体结构是错误的，所以没有生物活性。 8、目标蛋白的复性 （1）原理：在变性剂溶液中，溶解的蛋白质呈变性状态，即蛋白质高级结构被破坏，但一级结构和共价键没有破坏。当部分变性剂被除去后，蛋白质会重新折叠成具有活性的正确构型，该过程称复性。 （2）复性方法： 稀释法除变性剂 － 加入大量水或缓冲液。 膜分离法除变性剂 － 透析、超滤、电渗析。 层析法：凝胶层析，高效疏水层析 9、沉淀法的分类 根据所加入的沉淀剂的不同，沉淀法可以分为： （1）盐析法； （2）等电点沉淀法； （3）有机溶剂沉淀法； （4）非离子型聚合物沉淀法； （5）聚电解质沉淀法； （6）复合盐沉淀法等 （7）亲和沉淀法 （8）选择性沉淀法。 10、盐析：在高浓度的中性盐存在下，蛋白质（酶）等生物大分子物质在水溶液中的溶解度降低，产生沉淀的过程。 当中性盐加入蛋白质分散体系时可能出现以下两种情况： （1）“盐溶”现象(salt-in)—低盐浓度下，增加蛋白质分子间静电斥力，蛋白质溶解度增大 。 （2）“盐析”现象(salt-out)—高盐浓度下，中和电荷、破坏水化膜，蛋白质溶解度随之下降 。 盐析是可逆的，而变性是不可逆的 11、盐析的影响因素：2）离子类型 在相同离子强度下，盐的种类对蛋白质溶解度的影响有一定差异，一般的规律为：半径小的高价离子的盐析作用较强，半径大的低价离子作用较弱 阴离子盐析效果 ： 柠檬酸＞PO43- ＞SO42- ＞CH3COO-＞ Cl-＞ NO3-＞SCN- 阳离子盐析效果： NH4+ ＞ K+＞Na+ ＞高价阳离子 阴离子的影响大于阳离子 12、溶剂萃取法的特点 萃取过程有选择性 能与其它步聚相配合 通过相转移减少产品水解 适用于不同规模 传质快 周期短，便于连续操作 毒性与安全环境问题 13、青霉素的多级逆流萃取 青霉素发酵过滤液进入第一级萃取罐，在此与从第二级分离器来的萃取相（含产品青霉素）混合萃取，然后流入第一级分离器分成上下层， 上层为萃取相，富含目的产物，送去蒸馏回收溶剂和产物进一步精制； 下一层为萃余相，含目的产物浓度比新鲜料液低得多，送第二级萃取； 如此经三级萃取后，最后一级的萃余相作为废液排走。 14、双水相萃取概念：利用物质在不相溶的两水相间分配系数的差异进行萃取的方法。 15、双水相萃取的优点 使固液分离和纯化两个步骤同时进行，一步完成； 适合热敏物质的提取，主要是胞内酶； 亲水性聚合物加入水中，形成两相，在这两相中，水分都占大比例（70～90％），这样生物活性蛋白质在两相中不会失活，且以一定比例分配于两相中； 分相时间短，5~15min； 设备投资少，操作简单，易于工程放大和连续操作； 16、膜分离的特点 ①操作在常温下进行； ②是物理过程，不需加入化学试剂； ③不发生相变化（因而能耗较低）； ④在很多情况下选择性较高（膜性能可调整）； ⑤易于与其他分离过程结合，浓缩和纯化可在一个步骤内完成； ⑥设备易放大，可以分批或连续操作。 ⑦膜组件结构紧凑，操作方便，可频繁启停，易自