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记住： 凝集与絮凝的区别： 凝聚是指在电解质作用下，由于胶粒之间扩散双电层电位下降，电排斥作用降低，破坏胶体体系的分散状态，使之不稳定相互凝集成1mm左右块状凝聚体的现象。絮凝指在某些高分子絮凝剂的作用下，基于架桥作用，使胶粒交联成团、形成10mm大小的较大絮凝团的过程。采用凝聚方法得到的凝聚体，其颗粒是比较细小的，有时还不能有效的进行分离。采用絮凝法则可以形成粗大的絮凝体，使发酵液较容易分离。 常用的凝聚剂电解质有：硫酸铝 Al2(SO4)3?18H2O（明矾）； 氯化铝 AlCl3?6H2O; 三氯化铁 FeCl3; 硫酸亚铁 FeSO4·7H2O ； 石灰；ZnSO4；MgCO3 目前最常见：聚丙烯酰胺类絮凝剂 Fe3+的去除 可加黄血盐使其形成普鲁士兰沉淀而除去。 4Fe3+ + 3K4Fe(CN)6=Fe4[Fe(CN)6]3↓+ 12K+ 记住：杂蛋白的去除方法 沉淀法 包括：等电点沉淀法 蛋白质的等电点大都在酸性范围内(pH4.0～5.5)，调节发酵液的pH到蛋白质的等电点是除去蛋白质的有效方法。和酸碱调节，使蛋白质与离子形成沉淀 在酸性溶液中，蛋白质与一些阴离子形成沉淀，如三氯乙酸盐、水杨酸盐、苦味酸盐等； 在碱性溶液中，蛋白质与一些阳离子形成沉淀，如Ag+、Cu2+、Zn2+、Fe3+等。 变性：加热，大幅度调节pH值，加酒精、丙酮等有机溶剂或表面活性剂等。 吸附法：加入某些吸附剂或沉淀剂吸附杂蛋白质而除去。 记：板框过滤机过滤过程 板框过滤机的操作是间歇式的，每个操作循环由装合、过滤、洗涤、卸渣、整理五个阶段。 1)、装合： 将板与框按 1-2-3-2-1-2-3的顺序，滤板的两侧表面放上滤布，然后用手动的或机动的压紧装置固定，使板与框紧密接触。 2)、过滤： 用泵把滤浆送进右上角的滤浆通道，由通道流进每个滤框里。滤液穿过滤布沿滤板的凹槽流至每个滤板下角的阀门排出。固体颗粒积存在滤框内形成滤饼，直到框内充满滤饼为止。 3)、洗涤： 将洗水送入洗水通道，经洗涤板左上角的洗水进口，进入板的两侧表面的凹槽中。然后，洗水横穿滤布和滤饼，最后由非洗涤板下角的滤液出口排出。在此阶段中，洗涤板下角的滤液出口阀门关闭。 4)、卸渣、整理 打开板框，卸出滤饼，洗涤滤布及板、框。 记：细胞破碎（cell rupture）技术是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁，使细胞内物质包括目的产物成分释放出来的技术。 细胞壁结构对破碎的影响 微生物细胞和植物细胞外层均为细胞壁，细胞壁里面是细胞膜，动物细胞没有细胞壁，仅有细胞膜。 通常细胞壁较坚韧，细胞膜脆弱，易受渗透压冲击而破碎，因此细胞破碎的阻力主要来自于细胞壁。 不同细胞壁的结构和组成不完全相同，故细胞壁的机械强度不同，细胞破碎的难易程度也就不同。 记：细胞破碎方法及原理：机械破碎法、物理破碎法、化学渗透法、酶溶法 记：包涵体复性（间歇式流加稀释复性法）概念？ 记：目标蛋白的复性原理：原理：在变性剂溶液中，溶解的蛋白质呈变性状态，即蛋白质高级结构被破坏，但一级结构和共价键没有破坏。当部分变性剂被除去后，蛋白质会重新折叠成具有活性的正确构型，该过程称复性。 记；盐析的影响因素：2）离子类型 在相同离子强度下，盐的种类对蛋白质溶解度的影响有一定差异，一般的规律为：半径小的高价离子的盐析作用较强，半径大的低价离子作用较弱 阴离子盐析效果 ： 柠檬酸＞PO43- ＞SO42- ＞CH3COO-＞ Cl-＞ NO3-＞SCN- 阳离子盐析效果： NH4+ ＞ K+＞Na+ ＞高价阳离子 阴离子的影响大于阳离子 四环素的沉淀提取 四环素由链丝菌发酵获得 四环素等电点pI=5。当溶液的pH 等于等电点时，四环素易从水溶液中沉淀出来（游离碱），因此可用于四环素的提取。 四环素又能与尿素形成1：1的复盐，从水溶液中沉淀出来，该复盐溶于有机溶剂时，即分解成四环素和尿素。 四环素与尿素的这一反应具有特异性：金霉素，土霉素都不能与尿素形成复合物沉淀。利用这一性质，可精制四环素。 记：料液：在溶剂萃取中，被提取的溶液， 溶质：其中欲提取的物质， 萃取剂：用以进行萃取的溶剂， 萃取液：经接触分离后，大部分溶质转移到萃取剂中，得到的溶液， 余液：被萃取出溶质的料液。 记：溶剂萃取法的特点 萃取过程有选择性 能与其它步聚相配合 通过相转移减少产品水解 适用于不同规模 传质快 周期短，便于连续操作 毒性与安全环境问题 记： 记：双水相萃取的优点 1、使固液分离和纯化两个步骤同时进行，一步完成； 2、适合热敏物质的提取，主要是胞内酶； 3、亲水性聚合物加入水中，形成两相，在这两相中，水分都占大比例（70～90％），这样生物活性蛋白质在两相中不会失活，且以一定