细胞功能的流式细胞仪检测.pdfVIP

生物秀 -专心做生物！ 细胞功能的流式细胞仪检测 细胞功能检查在近几年来由于流式细胞仪技术的开展有了很大的提高，不同于其它技 术，最大的一点在于流式细胞仪能快速、定量地检测，分析单个不同细胞的功能，并且获得 大量同一细胞或不同细胞总体的状况，也就是说常规的一些标本检测即可满足多人份的不同 细胞 群体的检查结果。 本章节主要涉及的是吞噬细胞（包括巨噬细胞和多形核细胞）。影响吞噬细胞的数量和 功能的因素很多，其中包括各种药物作用，例如皮质类固醇药物常常引起循环血液中白细胞 数量的升高，其机理是主要促进骨髓中的白细胞释放，同时降低白细胞粘附血管内皮的能力 至减少了白细胞的血管外移，还有轻℃提高了白细胞在循环血液中的半衰期。正常情况下， 中性粒细胞在骨髓中需 5-7 天后释放至循环血液中，其半衰期仅为 7h ，当趋向和进入各种 组织中，在 1 至2 天内发挥其生理功能，最终不管其功能状况如何（静止或激活），主要经 过巨噬细胞的吞噬和粘膜表面的降解来完成。由于中性粒细胞在人体中数量大、半衰期短， 在微环境中稍微有变化，即会产生一些复杂的生理作用。本节目的是介绍用流式细胞仪检测 m 及阐述中性粒细胞和巨噬细胞的功能。 o 吞噬功能 c . 一般来说，吞噬过程大致分为几步：首先是识别，然后相互间接触、结合，最后才是内 o 吞与消化。其中关键的一步在于它们之间的正常接触。当机体调理作用的紊乱和吞噬细胞的 o i 分解作用的缺陷，常引起吞噬的异常现象。介导吞噬的细胞表面受体主要是C3b(CR)和FcR b 受体。Bassoe 和 Berbnes 运用流式细胞法很好地分析了细菌吞噬现象，指出流式细胞仪测 b 定的两大优点：1. 要求的细胞数量相对较少；2. 白细胞分离步骤不多。因此它特别适用于 . 儿童等低年龄患者。其检测原理是利用吞噬细胞内吞标记了FITC 的细菌，并且保持吞噬细 w 胞细胞膜的完整性，使后加入的EB 染料只能结合未被吞噬的细菌，这样通过流式细胞仪可 w 以区分已吞噬细菌和末吞噬细菌的吞噬细胞等情况。 应用流式细胞仪检测吞噬功能的方案很多，依据被用来内吞的微粒不同而言。目前在台 w 式流式仪上常用的、简单的、直观的方法是利用荧光标记的白色念珠菌作为内吞的对象，当 吞噬完成后，加入 EB 染料，与未被吞噬的菌体结合，这个吞噬过程可被细胞松驰素 （cytochalasin B,5ug/ml）完全抑制，可用作质控对照，在448nm 的波长下，吞噬细胞内的 秀 菌体发出绿色荧光，而胞外的菌体发出红色荧光，原理在于胞外被标记FITC 的细菌发出的 物 生 FITC 能够激发EB 染料，使其产生红色荧光，而胞内则只有绿色荧光的产生，由于这个方 法未被正式接受，现在更常用的是