防风高效液相色谱法.docVIP

防风高效液相色谱法 [关键词] 防风；高效液相色谱法；大庆；升麻苷；5-o-甲基维斯阿米醇苷 [key words] saposhnikovia divaricata (turcz.) schischk.; high performance liquid chromatography; daqing; prim-o-glucosylcimifugin; 4’-o-beta-glucopyranosyl-5-o-methyl visamminol 防风为伞形科植物防风.能解表祛风，胜湿止痉，用于感冒头痛、风湿痹痛、风疹瘙痒及破伤风等症。防风中的化学成分包括色原酮、挥发油、香豆素、杂多糖等类物质，药理实验表明，其具有解热、镇痛、镇静、抗炎、抗过敏、抗惊厥和增强机体非特异性免疫功能的作用。《中国药典》2010年版中以防风中的升麻苷及5-o-甲基维斯阿米醇苷为主要成分进行含量测定，近年来也有人根据实际需要建议测量其中的多种有效成分以完善防风药材的质量控制。本文参考《中国药典》2010年版标准，对黑龙江省大庆市不同地区防风中升麻苷及5-o-甲基维斯阿米醇苷的含量进行对比分析，旨在建立大庆地区的防风质量标准，为防风药材的质量评价及合理使用提供参考依据。 1 仪器与试药 1.1 仪器 岛津lc-20a型高效液相色谱仪（日本岛津公司），配有紫外检测器，色谱柱为inertsil ods-sp（4.6 mm×150 mm，5 μm）；model c3860超声仪（cbl photoelectron technology co. lid.）；esj万分之一电子天平（沈阳龙腾电子有限公司）。 1.2 试药 升麻苷（批号：111522-201005）及5-o-甲基维斯阿米醇苷（批号：111523-201005）均购自中国药品生物制品检定所；甲醇为分析纯，水为吉林产娃哈哈纯净水；防风所有样品经哈尔滨医科大学大庆校区药学系刘金杰教授鉴定，均为伞形科植物防风saposhnikovia divaricata （turcz.） schischk.的根。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 流动相：甲醇-水（40∶60），流速：1 ml/min，检测波长：254 nm，进样量：10 μl。理论塔板数按升麻苷计算，不低于2 000。按5-o-甲基维斯阿米醇苷计算，不低于2 500。 2.2 对照品溶液的制备[6] 精密称取升麻苷对照品4.6 mg置于10 ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度；精密称取5-o-甲基维斯阿米醇苷对照品5.5 mg置于10 ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。 2.3 供试品溶液的制备 取防风药材0.25 g精密称定，置于50 ml圆底烧瓶中，加入甲醇10 ml，称重，水浴回流2 h，甲醇补足失重，过0.45 μm微孔滤膜，进样10 μl。 按上述条件分别进样，得升麻苷对照品、5-o-甲基维斯阿米醇苷对照品、防风样品的hplc色谱图。见图1。 2.4 标准曲线的绘制 分别准确量取升麻苷对照品和5-o-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液各0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml置于同一5 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，取10 μl进样，按上述色谱条件进行分析测定，以峰面积y（mv）为纵坐标，对照品溶液浓度x（mg/ml）为横坐标，进行回归计算。结果得升麻苷的标准曲线为y=23 659x-3 276.6，r=0.999 9（n=6），线性范围为18.4～92.0 μg/ml。5-o-甲基维斯阿米醇苷的标准曲线为y=21 217x-8 217.8，r=0.999 8（n=6），线性范围为22.0～110.0 μg/ml。表明两种成分在检测范围内线性关系良好。 2.5 精密度试验 分别精密量取升麻苷及5-o-甲基维斯阿米醇苷的对照品溶液各0.5 ml，置于同一5 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，取10 μl进样，重复进样6次，记录峰面积，计算rsd分别为0.87%和1.04%，rsd均小于3%，表明仪器精密度良好。 2.6 重复性试验 精密称取同一产地的防风药材6份，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液并进行测定，得到相应的峰面积，计算rsd分别为2.67%和2.23%，rsd均小于3%，表明方法的重复性良好。 2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，在上述色谱条件下，分别于0、2、4、6、8、10、12 h测量，结果在12 h内样品中的升麻苷及5-o-甲基维斯阿米醇苷的峰面积rsd均小于3%，表明样品在12 h内稳定。 2.8 加样回收率试验 精密称取6份已知含量的防风药材粉末0.25 g，分别加入对照品溶液适量，按“2.3”项下方法制备供试液并分析，结果显示，样品加样回收率在98.6%～104.3%，rsd小于3.0%