苏云金芽孢杆菌几丁质酶基因的克隆及诱导表达.pdfVIP

第 50卷第 3期 湖 北 农 业 科 学 Vol|50No．3 2011年 2月 HubeiAgriculturalSciences Feb．．2011 苏云金芽孢杆菌几丁质酶基因的克隆及诱导表达 蔡亚君 ．一．袁志明27胡晓敏 ，蔡全信 (1．武汉纺织大学环境科学研究所 ，武汉 430073；2．中国科学 院武汉病毒研究所 ，武汉 430071) 摘要 ：从 苏云金 芽孢杆 菌 (Bacillusthuringiensis)T40A001中提取基 因组 DNA，通过 PCR的方法克隆 了几 丁质酶 chiAC基 因 (GenBank登录号为 EF427670)。置换 chiAC基 因的启动子 为 T7启动子时 ，chiAC基 因能在 IPTG诱 导下在 大肠杆菌 中大量表达 ．并产生大小约 70kDa的表达产物。 关键词：苏云金芽孢杆菌：几丁质酶基 因；克隆；序列分析 ；表达 中图分类号：Q786 文献标识码 ：A 文章编号 ：0439—8114(2011)03—0599—04 Cloning and Expression ofChitinaseEncoding Gene ofBacillusthuringiensis T04A001Strain CAIYa-jan1,2YUAN Zhi-ming~，HU Xiao-min，CAIQuan—xin (1．InstituteofEnvironmentalScience，WuhanTextileUniversity，Wuhan430073，China； 2．WuhanInstituteofVirology．TheChineseAcademyofSciences，Wuhan430071，China) Abstract：ChitinasegenechiAC (GenBank Accession Number：EF427670)was cloned by PCR from Bacillus thuringieusi~ T04A001genomic DNA．ExpressionofchiAC underT7 promoterinEscherichiacolicould induced byIPTG；and itproduced a protein whose molecularweightwasabout70 kDa． Key words：Bacillusthuringiensis；chitinasegene；clone；sequenceanalysis；expression 几丁质酶在芽孢杆菌 中广泛存在 ．目前已有多 方面进行研究 ．可为几丁质酶更好 的应用于生物防 种芽孢杆菌的几丁质酶基 因得到了克隆与表达 ．如 治提供依据 环状芽孢杆菌 (Bacilluscirculans)、蜡状芽孢杆菌 本 研 究 对 产 几 丁 质 酶 活 力 高 的 Bt菌株 (B．ceFeus)、苏云金芽孢杆菌 (B．thuringiensis。简称 T04A001]的几丁质酶基因进行 了克隆、测序分析 ， Bt)、枯草芽孢杆菌 (B．s“btili)以及地衣芽孢杆菌 并将 T04AO01菌株 的几丁质酶基 因chiAC的开放 (B．1icheniformis)等 引 苏云金芽孢杆菌因为对多 阅读框 (Openreadingflame，ORF)在 T7启动子调 种害虫具有毒杀作用而一直为人们所关注 ．目前 已 控下进行原核表达 几丁质酶基因的序列测定及其 有十多个亚种 的苏云金芽孢杆菌被证 明能产生几 在大肠杆菌中的大量表达为研究芽孢杆菌几丁质 丁质酶[3]有报道证明．苏云金芽孢杆菌 自身产生的