荧光光谱在蛋白质分子构象研究中的应用.pdfVIP

第 8 卷　第 4 期 淮　海　工　学　院　学　报 V o l. 8　N o. 4 　 1999 年 12 月 Jou rn a l o f H u a ih a i In st itu te o f T echno logy D ec. 1999 　 　　文章编号:( 1999) 荧光光谱在蛋白质分子构象研究中的应用 1 1 2 1 杨家祥 　张玉慧 　许兴友 　刘清亮 ( 1 中国科学技术大学 化学系, 安徽 合肥　230026) (2 淮海工学院 化学工程系, 江苏 连云港　222005) 摘　要　荧光光谱法是研究蛋白质在水溶液中分子构象的一种有效方法, 文章综述了常见的蛋白质 荧光光谱的研究方法和现象, 并介绍了几种荧光光谱新技术。 关键词　荧光光谱法; 蛋白质; 构象 中图分类号　 6573 1　　　文献标识码　 O A 0　前言 白质分子含有的黄素腺嘌呤二核苷酸 (FA D ) 也能 发射荧光。 蛋白质的研究方法很多, 可以概括为两大类: 一 、 以及 由于其侧链生色基团的不 T rp T y r Ph e 类是测定溶液中的蛋白质分子构象。如核磁共振法, ( ) 同而有不同的荧光激发和发射光谱 图 1 。其中 圆二色谱法, 激光拉曼光谱法, 荧光光谱法, 紫外差 T rp 的荧光强度最大, T y r 次之, Ph e 最小。因为蛋 光谱法, 氢同位素交换法。另一类是测定晶体蛋白质 白质的荧光通常在 280 nm 或更长的波长被激发, 的分子结构。如 射线衍射分析法和小角中子衍射 X Ph e 在绝大多数实验条件下不被激发, 所以很少能 法。 射线衍射分析法虽然可以较准确地测量晶态 X 观察到Ph e 的发射。这样蛋白质的内源荧光主要来 蛋白质分子的空间结构, 但有许多蛋白质不能培养 自 和 残基。 残基对微环境的变化很敏 T rp T y r T rp 出单晶, 方法也很复杂, 而且生命体中的蛋白质多数 感, 并且大多数蛋 白质中都含有几个不 同种类 的 以溶液状态存在, 与晶体中的结构往往有一定的差 T rp 残基, 因而常作为内源荧光探针来研究溶液状 别。中子衍射法由于仪器昂贵等原因, 目前该方法应 态下蛋白质的构象。 用于蛋白质分子的构象研究才刚起步。荧光光谱法 是研究蛋白质分子构象的一种有效方法。它能提供 包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、 荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数, 这些参数从各 个角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些 参数的测定, 不但可以做一般的定量分析, 而且还可 以推断蛋白质分子在各种环境下的构象变化, 从而 阐明蛋白质结构与功能之间的关系。同时, 荧光光谱 法还具有灵敏度高、选择性强、用样量少、方法简便 等优点。所以, 该方法在蛋白质分子构象研究中得到 越来越广泛的应用。