高效液相色谱仪(HPLC)校正方法.docVIP

高效液相色谱仪（HPLC）校正方法0.1?????? 输液系统： 0.1.1??? 梯度误差GC不超过±3% 0.1.2??? 泵流量设定值误差 Ss＜±2% 0.1.3??? 流量稳定性误差 SR＜±2% 0.2?????? 紫外检测器性能 0.2.1??? 基线噪声不超过5×10-4AU，基线漂移不超过5×10-3AU 0.2.2??? 定量测量重复性误差（6次进样）RSD≤1.5% 0.2.3??? 最小检测浓度不超过1×10-7g/ml萘/甲醇溶液 0.2.4??? 可调波长紫外可见光检测器波长示值不超过±2nm(HP1100高效液相色谱仪可由仪器自身完成) 1????????? 校正条件 1.1?????? 环境温度10-30℃，相对湿度低于65% 1.2?????? 校正设备 1.2.1??? 秒表 分度值小于0.1 s 1.2.2??? 分析天平 最大称量200g,最小分度值0.1mg 1.2.3??? 容量瓶 1.2.4??? 微量注射器 1.3?????? 标准物质和试剂 1.3.1??? HPLC用甲醇、纯水，分析纯的丙酮 1.3.2??? 1×10-4g/ml，1×10-7g/ml的萘甲醇溶液 1.3.3??? 紫外波长标准溶液 2????????? 校正方法 2.1?????? 梯度误差GC的校正 2.1.1??? 进行梯度洗脱程序，A溶剂为水，B溶剂为0.1%丙酮的水溶液，B经5个阶段从0变到100%，20%—40%—60%—80%—100%，重复测量两次，取平均值，求各段梯度误差Gci，取最大作为仪器梯度误差，公式：Gci=（Li—Lm）/Lm×100% Li：第i段信号值的平均值； Lm ：各段输出信号平均值的平均值 可接受标准： -3%≤Gci≤3% 2.2?????? 泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差SR的校正 2.2.1??? 将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好，以甲醇为流动相，按表一设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确的收集10-25分钟，称重，按下式计算流动相流量设定值误差Ss和流动相流量稳定性误差SR。公式：Ss=（Fm-FS）/Fs 100% 可接受标准：-2%≤Ss≤2% SR=（Fmax-Fmin）/F×100% 可接受标准：-2%≤SR≤2% Ss：流量设定值误差（%）； Fm=（W2- W1）/ρt.t：流量实测值（ml/min） W2 ：容量瓶+流动相的重量（g）； W1：容量瓶的重量（g）； Fs：流量设定值（ml/min）； ρt：实验室温度下流动相的密度（g/cm3）； t：收集流动相的时间（min）； SR ：流量稳定性误差（%）； Fmax 为同一组测量中流量最大值（ml/min）； Fmin：同一组测量中流量最小值（ml/min）； F 为同一组测量值的算术平均值（ml/min） 表一：Ss和SR的校正 流量设定值（ml/min） 1.0 1.5 测量次数 3 3 收集流动相时间（min） 15 10 允许误差 Ss 2％ 2％ SR 2％ 2％ 2.3?????? 基线噪声和漂移 2.3.1??? 选用C18的色谱柱，以波长254nm,流动相为100%甲醇，流速1.0ml/min，仪器稳定后记录基线30min，求基线噪声Nd。可接受标准：Nd≤5×10-4AU 2.3.2??? 基线漂移用1h内基线偏离原点的值（AU/h）表示。可接受标准：D≤5×10-3AU/h 2.4?????? 最小检测浓度 2.4.1???????????? 以上述色谱条件下，进样20ul的1×10-7g/ml的萘甲醇溶液，计算最小检测浓度CL。公式： CL= 2 Nd C×20 HV Nd：基线噪声，mm； C：标准溶液浓度，g/ml； H：标准溶液色谱峰的峰高，mm； V——进样体积，ul。 2.4.2???????????? 可接受标准：CL≤1×10-7g/ml 2.5?????? 定量测定重复性的校正 将仪器联接好，使之处于正常工作状态，波长254nm,流动相为100%甲醇，流速1.0ml/min,用萘的甲醇溶液连续进样6次记录下峰面积，按下式计算相对标准偏差： n RSD = [∑（Xi- X ）2]/（n-1）×(1/ X )×100% I=1 RSD：相对标准偏差（%）； n：测量次数； Xi：第I次测量的峰面积 X – n次进样的峰面积算术平均值 可接受标准：RSD≤1.5% 2.6?????? 波长示值误差 2.6.1???????????? 用注射器将紫外波长标准溶液（标准波长为235nm