酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质.pptVIP

* 一、实 验 目 的： 1. 通过本实验使学生掌握电泳的基本原理 2. 学会薄膜电泳的基本操作 3. 掌握血清中不同蛋白质的分离方法 实验五、醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质 二、实 验 原理： 实验五、醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质 本实验是以醋酸纤维素薄膜作为支持体的区带电泳。 方法是将少量新鲜血清用点样器点在浸有缓冲液的乙酸纤维素薄膜上，薄膜两端经过滤纸与电泳槽中缓冲液相连，所用缓冲液pH值为8.6，血清蛋白质在此缓冲液中均带负电荷，在电场中向正极泳动。 由于血清中不同蛋白质带有的电荷数量及分子量不同而泳动速度不同。带电荷多及分子量小者泳动速度快；带电荷少及分子量大者泳动速度慢，从而彼此分离。 电泳后，将薄膜取出，经染色和漂洗，薄膜上显示出五条蓝色区带，每条带代表一种蛋白质，按泳动快慢顺序，各区带分别为清蛋白、α1-球蛋白、 α2-球蛋白、 β-球蛋白和γ-球蛋白。 经洗脱比色观察不同蛋白质的区带。 三、实 验 方法： 实验五、醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质 1. 醋酸纤维素薄膜的润湿和选择 将2.0cm×8.0cm薄膜放入缓冲液中浸泡20min，整条薄膜颜色一致而无白色斑点，则表明薄膜质地均匀(实验中应选择质地均匀的膜)。 2. 制作电桥 将巴比妥缓冲液(pH=8.6)倒入电泳槽内，两槽缓冲液平衡至同一水平面。两电极槽各放入两层滤纸