苹果酸、柠檬酸含量测定方法(HPLC).docVIP

苹果酸、柠檬酸含量的测定 （HPLC法）原理苹果酸、柠檬酸在酸性缓冲液中，利用反相键合色谱法将其从样品基质中分离出来，根据该类物质在紫外波长下的吸收进行定性和定量分析。2）试剂1） 溶剂：水，过滤后的二次蒸馏水流动相：0.5%的H3PO4/KH2PO4缓冲液，PH=2.81, 含2.5%乙腈苹果酸、柠檬酸标准品；纯度99.2%和99.5%4苹果酸、柠檬酸标准溶液分别准确称取苹果酸、柠檬酸标准品0.2g 和 0.02g ，精确至0.0001g，用过滤后的二次蒸馏水将标准品溶解，转移、定容于50ml容量瓶中，混匀后贴标签备用。5苹果酸、柠檬酸标准工作溶液分别将上述标准品贮备液以5倍和10倍比例稀释，得到三个不同浓度的系列，在给定的色谱条件下，每一浓度样品进样三次，然后绘制出标准工作曲线。标准溶液应避光，在0~4下贮存，标准液贮存期不超过二个月。3）仪器所使用的玻璃仪器必须是洁净的。3.1 液相色谱：单元泵，可变波长检测器，化学工作站。3.2 色谱柱：ODS反相柱150mm * 4.6mm(ID).5um填充颗粒。3.3 进样器：20ul微量进样针3.4 色谱条件：流动相：0.5%H3PO4/KH2PO4缓冲液（PH=2.81）；含0.025%乙腈 。流量：1.0ml/min柱温：40检测波长：206nm?进样量：5ul?保留时间：苹果酸2.5min；