高效液相色谱HPLC-1.pptVIP

一、头孢克洛的HPLC测定法 高效液相色谱是近年来发展最快的方法，他能有效的分离供试品中可能存在降解产物、未除尽的原料和中间体等杂质，并能准确定量，适用于本类药物的原料、各种制剂及生物样本的分析测定。 色谱条件和系统适应性实验： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸二氢钾-乙腈溶液为流动相；流速为1ml/min;波长检测为254nm。精取头孢克洛对照品和头孢克洛δ-3-异构体对照品适量，加流动相溶解并制成每1ml中分别含有头孢克洛及头孢克洛δ-3-异构体约0.2mg的混合溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，头孢克洛及头孢克洛δ-3-异构体的分离度应符合要求。理论板数按头孢克洛峰计算不低于1500. 测定法： 1.取本品20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。 　2.另取头孢克洛对照品适量，同法测定。 　3.按外标法以峰面积计算出供试品中头孢克洛的含量。规定按无水物计算，含头孢克洛不得少于95%。 二、血清中阿司匹林和水杨酸的 高效液相色谱测定法 经临床验证，低剂量口服阿司匹林( ASA)可抑制血小板过度凝集的疾病，如心肌梗死和手术后的深部静脉血栓形成，并有预防缺血性脑血管病的作用。由于ASA的服用剂量小，而且易水解，因此可采用反相高效液相色谱法快速、灵敏地同时测定人血清中ASA和水杨酸(SA)的浓度。 色谱条件 填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶（5μm），色谱柱4. 6mm×150mm；流动相为甲醇-水-正丁醇-磷酸( 300：200: 10:0.05)；检测波长为237nrn；内标物为苯甲酸；柱温为室温。 内标溶液 苯甲酸的甲醇溶液，浓度为0.1 mg／ml。 对照品溶液的制备 精密称取ASA和SA对照品适量，加甲醇溶解并制成浓度分别为o．5㎎／ml和o．1㎎／ml的溶液。 血清样品的处理与线性关系 取血清100μl，置离心管中，加入30%高氯酸溶液50μl与不同浓度的ASA和SA对照品溶液及内标溶液适量，使浓度均为10mg／ml。涡旋混合2分钟，离心5分锋，取上清液20μl进样。 课本中的其他例子 1、Page 71 高效液相色谱法介绍及应用示例 2、Page 125 巴比妥药物含量测定 3、Page 141 离子对高效液相色谱法检查间氨基酚的限量 4、155 固相萃取-反液相色谱测定法 5、Page 181 硫酸沙丁胺醇片的测定 6、Page 190 马来酸依那普利片、盐酸喹那普利的含量测定 7、238 反相及离子对高效液相色谱法 8、Page 377 重组人粒细胞集落刺激因子的肽图分析 9、Page 391 反相高效液相色谱法测定生白能的含量 Page 152 以对照品浓度为横坐标，峰高比（H标／H内）为纵坐标，求出各自的回归方程和相关系数： ASA回归方程 y=5.8×10+ 5. 29×10 X,r=0. 9996 SA回归方程 y=6．O×10+ 8. 33×10 X，r =0. 9981 　　ASA和SA的线性范围分别为：1—20μg/ml 和 2~30μg/ml。 高效液相色谱HPLC 生物分析小组作业 组长：姬付博 小组成员：李云峰、向治霖、华俊豪、赵琳琳、张阳、刘鸣军、魏友武、董鹏、杨睿、罗静、查效兵、周桃、李建月 目录 基础知识 应用及举例 色谱是什么？ 色谱和层析的原理是一样的，只不过我们很多人通常认为色谱是在柱状填料中进行的，而层析则是在薄层介质上进行的。因此层析有时候称为薄层色谱，而色谱则被称为柱层析。 结论：事实上色谱和层析是同样的概念，英文单词都是Chromatography 我们都有用纸层析法分离叶绿素的经历。 色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。 色谱法的发现 薄层色谱 常见的薄层色谱，也就是纸层析 色谱法的分离原理 溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。 又称为色层法、层析法。 高效液相色谱法 （High Performance Liquid Chromatography , HPLC） 高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器