不同方法提取鳗鲡病原茵DNA模板的差异分析.pdf

第 l7卷 第 3期 集关大学学报 (自然科学版) Vol_17 No．3 2012年5月 JoumalofJimeiUniversity(NaturalScience) Mav2012 [文章编号]1007—7405(2012)03—0161—06 不 同方法提取鳗鲡病原茵 DNA模板的差异分析 熊 静 ，关瑞章 ，郭松林 ，黄文树 ’，关淑芳 (1．集美大学水产学院，福建 厦门361021；2．鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心，福建 厦门361021； 3．农业部东海海水健康养殖重点实验室，福建 厦门361021) [摘要]利用吸光值、琼脂糖电泳及PCR差异扩增等指标 ，对酚一氯仿法、水煮法、碱裂解法3种方 法制备的鳗鲡病原菌DNA模板进行了差异分析．结果表明：1)不同方法提取的病原菌模板DNA的浓度、 纯度及分子质量大小存在差异，但以这3种方法提取的病原菌 DNA为模板，均能成功扩增到细菌 16SrD． NA和外膜蛋白的保守序列．其中，酚一氯仿提取的模板 DNA浓度较低 、纯度较高；水煮法和碱裂解法提 取的模板DNA浓度较高、纯度较低．2)电泳显示，3种方法获得的模板DNA扩增出的16SrDNA保守序 列条带均一，没有显著差异，但在外膜蛋白保守序列的扩增中却因菌种和模板提取方法的不同而存在差异． [关键词]模板DNA；水煮法；碱裂解法 ；酚 一氯仿提取法；16SrDNA；外膜蛋白基因 [中图分类号]S851．347．34 [文献标志码]A DifferentiationAnalysisoftheTemplatesDNA Extractedbv DifferentM ethodsfrom ThreePathogenicBacteriaStrainsofEels XIONGJing’，GUANRui—zhang，GUOSong—lin，HUANG Wen．shu，，。 GUAN Shu．fang ， (1．FisheriesCollege，JimeiUniversity，Xiamen361021，China；2．EngineeringResearchCenterof EelIndustrialTechnology，MinistryofEducation，Xiarnen361021，China；3．KeyLaboratoryof HealthyMarieultareforEastChinaSea，Mimst~ofAgriculture，Xiamen361021，China) Abstract：BytheUV absorbancevalues，mapsofagarosegeleleetrophoresisandthePCR amplification results，thisstudyanalyzedhtedifferentiationsofhtosetemplatesDNA extractedfrom threepathogenicbacte— riastrainsisolatedfrom eelsbyhtreemehtodsofwaterboiling，alkalilyaseandphenol—chloroform． There— suitsindicatedthatthetemplatesDNA presentedsomedifferencesinexrtactedconcentration，purityandmole． culesweights；andtheDNA extractedbyhtephenol—chloroform methodhaslowerconcenrtation higherpuri． ， tyands