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生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2009, December 25; 25(12): 2014-2021
Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061
cjb@ © 2009 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved
研究报告
Mycobacterium sp. NwIB-01 3--9α-
范书玥, 魏巍, 王风清, 魏东芝
, 200237
: 3- 甾酮-9α-羟基化酶(KSH)是微生物甾体降解途径中的关键酶, 在甾体药物制备中有重要价值。以本实验室从土
壤中自行筛选的分枝杆菌 Mycobacterium sp. NwIB-01 为出发菌株, 利用红平红球菌 Rhodococcus erythropolis SQ1 已报
道的 ksh 序列与已全基因组测序的分枝杆菌序列数据库进行比对分析, 根据同源基因设计简并引物获得部分 ksh 序列,
2
通过染色体步移扩增出全长 ksh(命名为 M.S.-ksh), 该基因与耻垢分枝杆菌M. smegmatis mc 155 的ksh 同源性为85%。
构建 pET32-ksh 表达载体, 转化大肠杆菌 BL21(DE3), 获得高表达重组转化子菌株, 经 IPTG 低温诱导, SDS- PAGE 电泳
分析, 目的蛋白主要为可溶性表达, 表达量占菌体总蛋白的 30% 以上, 用 Ni2+ 亲和层析柱纯化, 纯度达 90% 以上。本研
究为利用基因工程菌进行工业化生产甾体药物奠定了基础。
: 分枝杆菌 NwIB-01 , 3- 甾酮-9α-羟基化酶, 甾体降解, 异源表达, 分离纯化
Cloning, heterologous expression and purification of a
3-ketosteroid-9α-hydroxylase (KSH) from
Mycobacterium sp. NwIB-01
Shuyue Fan, Wei Wei, Fengqing Wang, and Dongzhi Wei
State Key Laboratory of Bioreactor Engineering, Newworld Institute of Biotechnology, East China University of ScienceTechnology, Shanghai
200237, China
Abstract: 3-ketosteroid-9α-hydroxylase (KSH), a key enzyme in the microbial steroid degradation, is highly valuable for the
production of some steroid drugs. Degenerate primers were designed by comparing the ksh from Rhodococcus erythropolis SQ1 and
its homologous sequences in the reported genome of Mycobacteria . Subsequently, a gene fragment
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