大鼠海马内注射β淀粉样蛋白上调了外周血T细胞中CCL3地表达.pdfVIP

大鼠海马内注射β淀粉样蛋白上调了外周血T 细胞中 CCL3 的表达1 郭大文，陈誉华** 中国医科大学基础医学院发育生物学教研室，卫生部细胞生物学重点实验室，沈阳（110001 ） 摘 要：为观察脑内β淀粉样蛋白（amyloid beta, Aβ）沉积对外周血T 细胞穿过血脑屏障的 影响，通过立体定位仪将 Aβ 肽注射到大鼠双侧海马（以 Aβ 反序列肽为对照），实时 1-42 42-1 定量PCR（RT-qPCR ）检测发现，Aβ1-42 上调了外周血T 细胞中巨嗜细胞炎症蛋白（macrophage inflammatory protein-1α，MIP-1α，也称CCL3 ）的表达，同时免疫荧光分析显示脑内的Aβ1-42 也引起了脑微血管内皮上MIP-1α 受体（CCR5 ）的表达增加，以及伴随的脑实质内T 细胞 数量的增加。然而，大鼠腹腔内注射抗MIP-1α 中和抗体则阻断了Aβ1-42 所致的脑内T 细胞 数量的增加。提示脑内Aβ沉积能诱导外周血T 细胞MIP-1α依赖性迁移入脑。 关键词：阿尔茨海默病，β淀粉样蛋白，CCL3 ，T 细胞，血脑屏障 学科分类号：R741 阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease ，AD ）是一个与年龄相关的神经系统退行性疾病。 尽管其发病机制至今尚不清楚，但遗传学和生物化学研究结果表明，β淀粉样蛋白（amyloid beta, Aβ）的过度生成和清除障碍在AD 发病过程中起中心作用[1] 。脑内高度聚集状态的Aβ [2] 。这种由小胶质细胞介导的免疫 沉积将活化小胶质细胞（microglia ）引起先天性免疫应答 性炎症反应是否需要外周血 T 细胞参与，一直是研究者关注的问题。尸检发现 AD 患者脑 实质内 T 细胞数量显著高于同龄对照人群和其他类型的痴呆患者[3]，但外周血 T 细胞穿过血 脑屏障进入脑内的机制尚不清楚。我们前期工作发现 AD 患者外周血 T 细胞过表达巨嗜细 胞炎症蛋白（macrophage inflammatory protein-1α，MIP-1α），体外研究证实MIP-1α与 T 细 胞穿过血脑屏障模型——人脑微血管内皮细胞（human brain microvascular endothelial cell, HBMEC ）有关。本文将Aβ 立体定位注射至大鼠海马，建立 Aβ在脑内沉积的动物模型， 1-42 旨在进一步研究MIP-1α与外周血 T 细胞穿过血脑屏障的关系。 1．材料与方法 1.1 材料 1.1.1 动物和细胞. 成年雄性Wistar大鼠，体重250g～270g ，由中国医科大学实验动物部提供。HBMEC 由 美国Johns Hopkins大学医学院K ．S．Kim教授惠赠。 1.1.2主要试剂及仪器. Aβ 、Aβ 、兔抗Aβ 抗体（Anaspec 公司），兔抗MIP-1α抗体（PeproTech 公司）， 1-42 42-1 1-42 磁分选器和分离大鼠 T 细胞的免疫磁珠及抗体（RD 公司），小鼠 抗 CD3 单克隆抗体（BD 公司），羊抗 CCR5 多克隆抗体、牛抗兔 IgG-TRITC （Santa Cruz 公司），兔抗VWF 多克隆抗体（abcam 公司），羊抗小鼠 IgG-TRITC 和兔抗羊 IgG-FITC （中 杉金桥）， Trizol （Gibco 公司），反转录酶AMV （Promega 公司），T4 DNA 连接酶、ExTaq RT-PCR 试剂（ TaKaRa 公司），pUCmT 载体（上海生工公司）， MIP-1α、GAPDH 的引物 1本课题得到教育部博士点基金资助项目(20040159002)的资助。 - 1 -