待定模板印迹聚合物对高丰度鸡蛋清蛋白质的脱除.pdfVIP

第42 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告 第11 期 2014 年11 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 1651 ~1655 DOI:10.11895/j.issn.0253-3820.140491 待定模板印迹聚合物对高丰度鸡蛋清蛋白质的脱除 * 杨春 栾新杰 刘国峰 周兴璐 王建 胡效亚 (扬州大学化学化工学院,扬州225002) 摘 要 将鸡蛋清溶液作为“待定模板”制备分子印迹聚合物,得到的聚合物作为色谱固定相,显示出能脱除 高丰度蛋白质的能力。 采用不同浓度的鸡蛋清进行印迹,可以得到具有不同蛋白脱除性质的聚合物。 经过实 验室自制的注射器色谱系统处理,蛋清中的高丰度蛋白质(如鸡卵清蛋白、溶菌酶、转铁蛋白)可从相应样品 溶液当中去除。 随着这些高丰度蛋白质谱峰消失,其它组分的质谱信号变得更加明显。 根据文献结果及实验 所得质谱数据,判定这些蛋白质分别是卵清白蛋白关联蛋白、转铁蛋白关联蛋白质、卵粘蛋白及黄素蛋白。 实 验表明,待定模板印迹方法具有脱除高丰度蛋白质,并同时保留、富集低丰度修饰蛋白质的能力。 关键词 待定模板印迹聚合物;鸡蛋清;蛋白质脱除;富集 1 引 言 在蛋白质组学研究中,人们已经积累了大量关于已知蛋白质的数据。 目前的研究重点主要集中在 [1] 发现具有新功能、或与疾病诊断和治疗相关的蛋白质方面 。 为了从复杂样品里提取和鉴定未知的低 丰度蛋白质,样品分离或高丰度蛋白质的脱除是十分必要的[2~4]。 在各种蛋白质脱除方法中,使用抗 [5~10] [11] 体、染料或者配基的亲和技术是最常用的方法 ,其它方法还包括多维分离 、限进介质(Restricted- [12] [13,14] access)材料 或者集成方法 。 印迹材料广泛涉及分子识别、分离及催化等领域[15~21] ,其中,冰胶(Cryogel)聚合物是一种大孔亲 水性材料,具有良好的稳定性及传质性能,适于大分子(如蛋白质)的印迹研究,也可用于高丰度蛋白质 [22] 的脱除 。 本研究组曾报道了处理复杂样品的冰胶材料,其中“待定模板”印迹聚合物起着关键作用, 印迹位点的种类及数量可通过改变模板的浓度进行调节[23,24]。 这类聚合物可将样品拆分为两部分。 一部分吸附在聚合物上,一部分保留在溶液中。 根据这种方法,理论上可用n个聚合物将复杂样品分成 任意n+1份,充分降低样品的复杂性,从而有利于蛋白质组学研究或生物标记物的发现。 本研究合成了4个冰胶聚合物,其中3个印迹聚合物均显示出高丰度蛋白质的脱除能力。 在去除部 分高丰度组分之后,流出液仍有3组蛋白质的信号。 硼酸吸附实验表明,它们可能是糖基化成分。 “待定 模板”印迹聚合物在脱除高丰度蛋白质的同时,能够保留从而富集翻译后修饰蛋白质(如糖蛋白等)。 2 实验部分 2.1 材料与试剂 丙烯酸、烯丙基胺、丙烯酰胺、N,N-亚甲基双丙烯酰胺(济南浩鹏化工厂);亚硫酸氢铵、过硫酸铵 (上海国药集团);其它试剂为分析纯。 2.2 “待定模板”印迹聚合物的制备 聚合物的制备参照文献[23]方法,并对单体配方经过了改进:各单体按照表1配成溶液,分成4份, 按照每8mL单体溶液加入0.4,0.8 和1.6mL鸡蛋清以及不加入鸡蛋清,经过超声脱气、引发、冰冻聚 合,得到3个印迹聚合物MIP-1,MIP-2和MIP-3,以及1个用于对照的非印迹聚合物(NIP)。 鸡蛋清在 3份溶液中加入的体积不同,稀释5~20倍不等。 为了洗