2011高考生物一轮复习 蛋白质和dna技术课件.pptVIP

高 频 考 点 1.蛋白质的提取和分离。 2.PCR技术的基本操作和应用。 实 验 要 求 1.蛋白质提取的原理和方法。 2.PCR技术的操作及原理。 1．方法及原理 (1)方法：电泳法。 (2)原理：①各种蛋白质分子带电性质的差异； ②分子本身大小、形状的不同。 2．实验操作程序 (1)点样：用微量加样器取新制血清，小心加到电泳样品槽的胶面上。 (2)电泳：打开并调节稳压稳流电泳仪进行电泳。 (3)染色：用质量分数为0.05%的考马斯亮蓝R250染色液对凝胶进行染色。 (4)脱色：用体积分数为7%的醋酸溶液脱色。 (5)制干胶板：保存液浸泡凝胶板后，放在两层透气玻璃纸中间自然干燥。 特别提醒：相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，而相对分子质量较大的蛋白质只能在凝胶外部移动，移动速度快，因此蛋白质分子彼此分离。 1.下面是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品的加入(图Ⅰ)和洗脱(图Ⅱ)示意图，请据图回答下列问题。 (1)在加样示意图中，正确的加样顺序是________。 (2)用吸管加样时，应注意正确操作，分别是①________、 ②________、③________。 (3)等样品________时，才加入缓冲液。 (4)待________接近色谱柱底端时，用试管收集流出液每________mL收集一管，连续收集。 解析：进行凝胶色谱操作加样时，加样前，打开色谱柱下端的流出口，使核内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，用吸管小心地将1 mL透析后的样品加到色谱柱的顶端，注意不可破坏凝胶面。吸管应贴着管壁加样，待样品完全进入凝胶层后才可关闭下端出口，加入缓冲液，待红色蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每次5 mL收集一管，连续收集。 答案： (1) ④→①→②→③　(2)不要触及破坏凝胶面　贴着管壁加样　使吸管管口沿管壁环绕移动　(3)完全进入凝胶层　(4)红色的蛋白质　5 1．细胞内DNA复制与PCR技术的比较 2.PCR技术反应过程中控制不同温度的意义 (1)95℃变性，双链DNA解旋为单链； (2)55℃复性，引物与两条单链DNA结合； (3)72℃延伸，耐高温的DNA聚合酶有最大活性，使DNA新链由5′端向3′端延伸。 2.多聚酶链式反应（PCR）是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历30多次下述循环：95℃条件下使模板DNA变性、解链→55℃条件下复性(引物与DNA模板链结合)→72℃条件下引物链延伸(形成新的脱氧核苷酸链)。下列有关PCR过程的叙述，不正确的是(　　) A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也 可利用解旋酶实现 B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对 原则完成的 C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、4种核糖核苷酸 D．PCR与细胞内DNA复制相比，其所需要酶的最适温度较 高 解析：PCR一般要经历30多次循环，每次循环可以分为变性、复性和延伸三步。从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸。DNA变性(90℃～95℃)：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。复性(55℃～60℃)：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。延伸(70℃～75℃)：在Taq酶(在72℃左右活性最高)的作用下，以dNTP(三磷酸脱氧核糖核苷酸的缩写)为原料，从引物的5′端向3′端延伸，合成与模板链互补的DNA链。 答案：C 【例1】 (2009·广东高考)(1)商品化植酸酶主要来自微生物。在产酶菌株筛选过程中，常在基本培养基中添加不溶于水的植酸钙制成固体平板，植酸钙被植酸酶分解后可在平板上产生________，可根据其大小选择目的菌株，所得菌株需要进一步测定植酸酶活性。活性测定可以植酸钠作为底物，活性可用一定条件下单位时间的________表示。 (2)利用上述所得菌株制备植酸酶的流程如下图： Ⅰ中的主要成分为________；Ⅱ中包含植酸酶等多种蛋白质。请写出一种纯化得到植酸酶的方法及其依据。________________________________________________________________________。 (3)为构建基因工程菌，可用PCR等技术从上述菌株中克隆植酸酶基因。PCR反应包括多次循环。每次循环包括三步：________________________。反应过程中打开模板DNA双链的方法是________。 (4)除植酸酶外，微生物还能应用在哪些酶的生产中？(至少写两种)_____________