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2015-09-22 发布于湖北
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构建重组质粒pEGFP-N1-ND CyclinB1及在胃癌细胞SGC-7901中的表达.pdf

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构建重组质粒pEGFP-N1-ND CyclinB1及在胃癌细胞SGC-7901中的表达.pdf

No．6 第3l卷第6期暨南大学学报(医学版) V01．31 JournalofJinan D∞． 2010 2010年12月 University(MedicineEdition) 构建重组质粒pEGFP—N1一ND CyclinBl及在胃癌细胞SGC-7901中的表达朱丽红1，毕伟2，陆大祥1，谭宇蕙3，杜标炎3，李杰芬3 (1．暨南大学医学院病理生理学教研室，广东广州510632；2．中山大学孙逸仙纪念医院神经科，广东广州510120；3．广州中医药大学基础医学院，广东广州510405) [摘要]目的：构建真核表达载体pEGFP·N1·NDCydinBl，并观察其在人胃癌细胞SGC-7901中的表达及对 SGC-7901活性的影响。方法：通过RT-PCR法扩增不可降解CyclinBl(ND q硪相1)，将其插入到pEGFP-N1载体的 Xho I和BamH I酶切位点，构建真核表达载体pEGFP-N1-NDCydinBl，并以PCB、双酶切、测序鉴定。通过脂质体法转染胃癌细胞SGC-7901，进行荧光检测、Westernblotting分析和流式细胞仪分析。结果：PCR、酶切及测序证明重 24 组质粒pEGFP-N1一NDCyclinBl构建成功。转染胃癌细胞SC,C-7901h后，荧光显微镜下观察到绿色荧光。West— em blotting检测到cya／,氓l的表达明显增加。流式细胞仪检测重组质粒细胞组凋亡指数高于对照组，差异有显著性。结论：成功构建pEGFP-NI．NDCrdi,dl荧光真核表达载体，并可在SGC=7901细胞中有效表达。 [关键词] 细胞周期；肿瘤不可降解Crdi柚l；细胞周期蛋白；绿色荧光蛋白； [中围分类号]R730．23 【文献标志码】A [文章编号]1000—9965(2010)06—0555—05 Constructionofthe vector eukaryoticexpression its 1and inSGC-7901 cells pEGFP··N1·-NDCyclinB expression ZHU Jie．fen3 Li．hon91，BIWei2，LUDa—xian91，TANYu—hui3，DU Biao．yan3，LI of (1．DepartmentPathophysiology，MedicalCollege，JinanUnivemity，Guangzhou510632，China； of of Yat-SenMemorial SunYat-Sen 2．DepartmentNeurology，Sun Hospital