cDNA文库建立和ESTs测序分析：一个发现与鉴定茶树功能基因的高效快速新途径.pdfVIP

第三弱伞因青年茶学学术讨论会论文集 eDNA文库建立与ESTs测序分析 一个发现和鉴定茶树功能基因的高效快速新途径 陈亮1，赵丽萍1，高其康2 (1中国农业科学院茶叶研究所，杭州310008；2浙江大学分析测试中心，杭州310029) A的mRNA，反转录合成双链 摘要：以Trizol一步法从龙并43春茶新梢中提取总RNA，分离纯化富含Poly eDNA，以^TripEX2为载体，构建了龙井43新梢eDNA文库。原始文库的滴度为6．8×105 pfulml，总克隆数 109 为3．5×105个，重组率为98．05％，扩增后文库总滴度为7．2X pfu／m1．对随机挑取的噬菌斑进行PCR鉴定， 表明插入片段大多分布在O．5-2．0kb之间，绝大部分在1．0．1．5kb左右。文库质量鉴定结果表明，构建的茶树 新梢eDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段。对4320个克隆的序列测定表明，获 得有用序列2963个，测序成功率为68．5％，其中空载和去除载体后序列短于150 bp有416个，震复的有863 个，重复率为33．88％，首批共获得1684个茶树ESTs。绝大部分ESTs的长度在300．700 bp之间，通过与NCBI 等基因数据库比对、查询和注释，获得已知功能基因或具推测功能基因607个，新基因1077个，证明ESTs 测序分析是一个发现和鉴定茶树功能基因的高效快速新途径。最后讨论了ESTs的优点和用途。 关键词：茶树；cDNA文库；EST；测序；新基因 eDNA and libraryconstruction，ESTs sequencinganalysis： A andeffectivenew tofindand novel rapid approach identify functionalfortea genes plant【Camelliasinensis(L．)O． Kuntzel 1 1 Chen Zhao Ga02 Liang Li．ping Qi．kang TeaResearch 31 andMeasurement (1 Institute，ChineseAcademyofAgricultmalSciences，Hangzhou0008，China；2 Center, Analyzing H 31 ZhejiangUniversiW．angzhou．0029China) AbstractTheconstructionofthefirsteDNA oftea sinensis inChina library plant【Camelliacv．Longing43