两种方法检测高致病性猪蓝耳病免疫抗体的对比试验.pdfVIP

试验研究 两种方法检测高致病牲 猪蓝耳病免疫抗体的对比试验 黄秀萍1，包祥嘉2，韩祥林2，孙军华2，王加裕1，徐根明1 (1．江苏省泰州市海陵区动物疫病预防控制中心。泰州225300； 2．江苏省泰州市动物疫病预防控制中心，泰州225300) 摘要：采用猪繁殖与呼吸综合征(蓝耳病)ELISA试剂盒和金标试纸检测高致病性猪蓝耳病免疫抗体，在首免后14d 两试验组用金标试纸法检测血清样品均为阳性，并一直持续到首免后112d；用ELISA法检测同份血清，在首免后28～ 35d出现阳性，两试验组阳性率分别为20％、30％，首免后49d阳性率为80％，此后阳性率逐渐下降，至98d时两组分 另q为0和20％。结果表明：猪繁殖与呼吸综合征(蓝耳病)疫苗免疫后抗体监测使用的方法不同，结果差异很大。 关键词：高致病猪蓝耳病；抗体；监测 针对目前高致病猪蓝耳病疫苗免疫后抗体水平监测中 加入100Is,L酶标抗体。室温孵育30min。甩去液体，每孔用 TMB底物溶 存在的一些问题，我们应用猪蓝耳病金标试纸条及进口 洗液300¨L清洗3～5次。每孔加入lOOmL ELISA试剂盒，对经高致病猪蓝耳病灭活疫苗(NVDC-JXAI 株)免疫后采集的猪血清进行比对实验。 按试剂盒给定计算公式进行判定。S／P值i0．4判为阳性。 1材料与方法 1．6．2猪蓝耳病金标试纸检测按说明书要求，于金标试纸 1．1试验猪30头28日龄左右的断奶仔猪由江苏畜牧兽条的加样孔中加入血清80～100斗L，将试纸条平放于桌面 医职业技术学院实习牧场提供。试验猪体质健康，经检测皆 上，在室温下静置15min后判定结果，检测线条带的色泽≥ 为猪繁殖与呼吸综合征(蓝耳病)病毒和抗体阴性。 1：40判为阳性。 1．2疫苗高致病性猪蓝耳病灭活疫苗(NVDC-JXAl2结果 株)，生产厂家：北京市兽医生物药品一厂，批号：089103，生 检测结果见附表1。 产日期：2008年1月17日。 表1不同方法对高致病性猪蓝耳病免疫抗体阳性检出率 1．3免疫程序将30头仔猪随机分成3组，每组各10头， 逐头佩戴耳标，记录编号。第l组28日龄时首免，56日龄时 二免，注射疫苗2mlJ次-头；第2组35日龄时首免，49日龄 时二免，注射疫苗2mL／次·头；第3组为注射生理盐水空白 对照组。 1A采血在正式试验前(记为Od)以及第一次注射疫苗 后第14、21、28、35、42、49、56、63、70、77、84、98、112d，分别经 前腔静脉逐头采血4ml，，常规方法分离血清，用于抗体检测。 1．5检测试剂猪繁殖与呼吸综合钲抗体检测试剂盒，美 国IDEXX公司生产，批号：09418一AD244(0000166)；猪繁殖 与呼吸综合征抗体金标快速检测试纸，购自福建省漳州市格 林沃生物技术有限公司。 1．6操作步骤 1．6．1 El。ISA试剂盒按试剂盒说明书，对采集的猪血清进 3分析讨论 行抗体检测，步骤如下：血清用样品稀释液进行40倍稀释， 3．1本试验采用II)EXX公司生产的猪繁殖与呼吸综合征 浓缩洗液恢复到室温后混匀并用去离子水做10倍稀释。在 (蓝耳病)抗体检测试剂盒(ELISA)和福建省漳州市格林沃生 试剂盒自带96孔板的Cl、Dl、C2、D2中加入100“L未稀释 物技术有限公司生产的猪蓝耳病金标试纸检测高致病性猪 的阴性对照样品，在A1、BI、A2、B2孔中加入100“L未稀释 蓝耳病免疫抗体，结果与华树明及金颜辉等报道的相一致。 的阳性对照样品，被检样品各加两孔，每孔100“L。室温孵