造血检验的基础理论1.pptVIP

造血兰大一院中心实验室 李娟 Hematopoiesis Cancer, leading killer worldwide 第一节 造血器官 造血器官(hematopoietic organ) -能够生成并支持造血细胞分化、发育、成熟的 组织器官 血细胞的起源 -中胚层的原始间叶细胞,主要包括骨髓、胸腺、淋巴结、肝脏和脾脏。 造血细胞 造血(hematopoiesis) -造血器官生成各种血细胞的过程 Blood islands in Yolk sac Liver (Spleen lymph nodes) * Developing bones - Red marrow 1. 中胚叶造血期（卵黄囊造血） 人胚第2周末开始~第9周止 血岛 血管壁 造血干细胞 2. 肝造血期 胚胎第6周~胚胎第7个月 红细胞生成 粒细胞生成 骨髓、脾、胸腺、淋巴结造血 3、骨髓造血期 红骨髓 红系、粒系、巨核系、淋巴及单核细胞 （二）出生后造血器官 1. 骨髓造血 红骨髓 黄骨髓 骨髓 -海绵样、胶状柔软的富于血管 的造血组织 -存在于长骨骨髓腔及各种 骨骨松质的网眼中 骨骼 红骨髓位于 骨盆的扁骨 脊椎骨 头颅 肋骨和胸骨 黄骨髓 淋巴器官 2. 淋巴器官造血 胸腺 脾 淋巴结 胸腺 胸腺的主要功能产生淋巴细胞、分泌胸腺素 脾脏 脾脏的功能：T、B细胞分化成熟的场所，具有造血、储血、滤血和免疫反应的功能。 淋巴结 3. 髓外造血 肝、脾、淋巴结 胸腺、肾上腺、腹腔的脂肪、胃肠道 第二节 造血微环境（ Hematopoietic Microenvironment ） 造血器官实质细胞四周的支架细胞组织。 （一）骨髓微血管系统 营养血管 动脉 小动脉 毛细血管 （二）骨髓基质细胞及其分泌因子 骨髓基质细胞 成纤维细胞（Fibroblasts） 内皮细胞（Endothelial cells ） 脂肪细胞（Fat cells） 巨噬细胞（Macrophages） 基质细胞 胞浆 细胞外基质 -纤维结合蛋白（Fibronectin，Fn） -胶原（Collagens） -层粘连蛋白（Laminin ，Ln） -弹性蛋白（Elastin） -蛋白多糖（Proteoglycans） 2. 骨髓基质细胞分泌的细胞因子 GM-CSF IL 干细胞因子（SCF） 白血病抑制因子（LIF） 转化生长因子β（TGF- β ） 第三节 造血干/祖细胞及骨髓间质干细胞 干细胞 （一）造血干细胞和造血祖细胞 1. 造血干细胞：又称多能干细胞 基本特征： 很强的增殖潜能。 多向分化的能力。 有自我复制的能力。 2．造血祖细胞：又称定向干细胞 目前已确认的造血祖细胞有： A 红细胞系造血祖细胞. B 粒细胞单核细胞系造血祖细胞. C 巨核细胞系造血祖细胞。 三、造血干（祖）细胞 （一）造血干细胞（HSC） 全能干细胞(THSC)（胚胎干细胞,ESC） 造血干细胞特征性 -占骨髓细胞的1%~2% -一些存在于外周血中 -CD34+ -缺乏系特异系列抗原表面标志（ CD3, CD4, CD8 等） -多数细胞处于G0期或静止期 造血干细胞表面标志 表面标志 CD34是人们普遍认同的造血干／祖细胞的代表性表面标志，随细胞分化成熟逐渐减少甚至消失。CD34抗原分子量为105—120KD，为高度糖基化的I型跨膜糖蛋白。CD34+造血细胞是一组异质性细胞群体，可进一步分化为CD34+ CD38+和CD34+ CD38-两个亚群。CD34+细胞群中90％为祖细胞，极少为造血干细胞。 虽然CD34+细胞不全是造血干细胞，但是造血干细胞应全部表达CD34分子，所以通过筛选CD34+细胞至少可以使造血干细胞得到富集。随着造血干细胞的分化成熟，CD34表达水平逐渐下降，成熟血细胞（Lin+）不表达CD34。 而最近的一些研究显示，CD34+Lin-造血细胞又起源于CD34-Lin-。CD34表面标志从无到有，又从有到无，充分显示了造血干/祖细胞产生、发育、分化和成熟的全过程。 造血干细胞的分离纯化 近年来，造血干细胞表面标志研究的发展丰富了干细胞分离纯化的手段。根据造血干细胞的表面标志，可通过免疫细胞化学、流式细胞仪、分子杂交和PCR等多种细胞生物学和分子生物学手段来检测造血干细胞。正如上述所提及的，现大多仍然基于对CD34+细胞的富集来筛选造血干细胞。 密度梯度离心法分离单个核细胞 （二）造血祖细胞（HPC） 即定向干细胞 失去自我更新能力 只能朝有限的分化方向或一个分化方向进