铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因的克隆与在昆虫细胞中的表达.pdfVIP

铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因的克隆及在昆虫细胞 中的表达1 曾铮，吴大洋，李春峰 西南大学蚕桑学重点实验室，重庆（400716 ） E-mail ：wdy@ 摘 要：以一产弹性蛋白酶的铜绿假单胞菌基因组DNA 为模板,经PCR 扩增得到约 1.5Kbp 的弹性蛋白酶基因,克隆到质粒 pET28a,连同其上游的 6×His 序列转移到 pBacPAK8 构建成 pBacPAK8-His-Ela 转移载体。采用 Lipofectin 法,将载体 pBacPAK8-His-Ela 和亲本病毒 BacPAK6 共转染 SF21 细胞,经空斑纯化分离得到重组病毒BacPAK6-Ela 。PCR 鉴定证实弹 性蛋白酶基因确实插入到病毒基因组的多角体启动子下游,SDS检测,在昆虫细胞中表 1达了约34Kda 的蛋白条带,以弹性蛋白为底物的生化反应证明了表达产物具有一定的生物学 活性。这一结果为弹性蛋白酶的制备提