天然海水高盐条件对海绵相关细菌抗菌活性及次级代谢产物的影响.pdfVIP

474 中国医药生物技术 2014 年 12 月第 9 卷第 6 期 Chin Med Biotechnol, December 2014, Vol. 9, No. 6 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2014.06.013 ·调查与研究· 天然海水高盐条件对海绵相关细菌 抗菌活性及次级代谢产物的影响 甄心，巩婷，崔美子，王瑞杉，朱平 海洋微生物生活在高盐、高压、低温、低光照、寡营养、 高压蒸汽灭菌 20 min 。 弱碱性的海洋环境中，因而形成了独特的生理特征和代谢 ⑵生物检定培养基：胰蛋白胨 5 g/L 、牛肉膏 3 g/L 、 机制，可产生与陆生微生物结构与活性迥然不同的次级代 酵母提取物 1.5 g/L ，pH 7.2 ~ 8.0 ，上层加入 0.8% 琼脂， 谢产物，如生物碱、萜类、环肽类和聚酮类等[1-2] ，成为 下层加 1.5% 琼脂。121 ℃ 高压蒸汽灭菌 20 min 。 海洋药物的重要来源之一。从海洋放线菌中分离得到的 1.1.3 仪器 Agilent 1200 分析型液相色谱仪、色谱柱 salinisporamide A 已经完成了 I 期临床研究，用于治疗多发 ZORBAX Eclipse XDB-C18 （4.6 mm × 150 mm ，5 μm ）均 性骨髓瘤[3] 。以从海洋真菌 Aspergillus sp. CNC-139 中获 为美国 Agilent 公司产品；HZQ-Q 恒温振荡摇床由哈尔滨 得的化合物为模板合成的 plinabulin （NPI-2358 ）已经进入 东联科学仪器有限公司生产。 II 期临床研究，用于治疗非小细胞肺癌[4] 。来自于卡纳里水 1.1.4 试剂 乙酸乙酯购自北京化学试剂厂；色谱纯甲醇 域深海沉积物中的链霉菌 NTK937 产生的 caboxamycin 购自北京宏达欣宇科技有限公司；酵母提取物和胰蛋白胨购 是一种新型的苯并噁唑抗生素，显示出较强的抗菌活性， 自英国 Oxoid 公司；琼脂购自北京拜尔迪生物科技有限公 对革兰阳性菌枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis ）IC50 仅为 司；牛肉膏购自北京双旋微生物培养基制品厂。天然海水于 8 μmol/L[5] 。海洋是一个特殊的生态系统，据文献报道，通 2013 年 9 – 10 月取自河北省秦皇岛市北戴河；淡水采用蒸 过模拟海洋环境的拟生态培养，可以诱导海洋真菌产生新的 馏水。 活性代谢产物[6-9] 。同时有研究表明，高盐条件造成的极端 1.2 方法 环境（如高渗透压和营养剥夺等）可以激活生物体内的沉默 1.2.1 天然海水的高盐条件对海绵相关细菌抗菌活性的影 基因或次级代谢产物合成酶，进而使海洋等来源的耐盐真菌 响 将待测菌株以灭菌牙签分别点种于天然海水和淡水（对 产生新的活性化合物[10-11] 。另据文献报道，培养基盐度对海 照）LB 固体培养基上，37 ℃ 培养 24 ~ 36 h ，长出菌落。 洋真菌的活性物质具有显著影响，其生物活性和活性物质的 将指示菌枯草芽孢杆菌 63501 菌悬液加入冷却至 50 ℃ 种类和产量可能有较大的差别[12-13] 。但是，应用天然海水培 的上层生物检定培养基中（浓度为 3% ），迅速摇匀，以灭 养基探讨海洋来源细菌的抗菌活性、次级代谢产物的 HPLC 菌移液管吸取适量添加到已经接种的下层培养基平板上，使 化学指纹的报道较少，本实验室曾研究报道天然海水对海绵 其均匀分布，37 ℃ 培养过夜，测量抑菌圈直径，并观察清 相关细菌的抗菌活性有影响[14] 。另有文献对细菌 HPLC 化 晰程度以评价其抗菌活性[14, 21-22] 。 学指纹研究进行了报道[15-17]，此外，有文献报道天然海水可