小鼠IDO真核表达载体的构建和其在未成熟树突状细胞中的表达.pdfVIP

第 30卷第 11期 第 　三 　军 　医 　大 　学 　学 　报 Vol. 30 , No. 11 2008年 6月 　　ACTA 　ACAD EM IA E　M ED IC INA E　M IL ITAR IS　TER TIA E　　 Jun. 2008 1033 文章编号 :(2008) 论著 小鼠 IDO 真核表达载体的构建及其在未成熟树突状细胞中的表达 1 1 1 1 2 1 1 ( 安晓静 ,钱桂生 ,王长征 ,夏俊波 ,党 　涛 ,廖 　伟 　　 第三军医大学新桥医院 : 全军呼吸内科研究所 ,全军呼吸病研 2 ) 究重点实验室 ; 全军心血管病研究所 ,重庆 400037 　　摘 　要 : 目的 　构建小鼠 p EGFPN 1IDO 真核表达载体并观察其在未成熟树突状细胞中的表达 。方法 　利用 R T PCR 方法扩增小鼠 IDO 基因全长 ,利用 DNA 重组技术将其定向插入到真核表达载体 p EGFPN 1。经酶切和测序鉴定后 , 用 DO TA P脂质体转染法转染未成熟树突状细胞 。通过 G4 18筛选 , 用倒置荧光显微镜观察转染的未成熟树突状细胞绿 色荧光蛋白的表达 ,用 R TPCR、W e stern b lot检测 IDO 的表达 。结果 　小鼠全长 IDO 基因序列正确插入 p EGFPN 1载体 , 与 GenB ank 中报道的序列一致 ,成功构建了 p EGFPN 1IDO 真核表达载体 ,并转染未成熟树突状细胞 ,成功地表达 目的基 因。结论 　真核表达载体成功构建和转染未成熟树突状细胞 ,并证明能有效表达于未成熟树突状细胞中 。 　　关键词 : 吲哚胺 2 , 3 - 双加氧酶 ;绿色荧光蛋白;真核表达载体 ;未成熟树突状细胞 　　中图法分类号 : R338. 12; R39433; R394. 2　　　 文献标识码 : A Con struction of eukaryotic expression vector con ta in ing m ou se IDO gene and its ex pression in imm a ture D C s 1 1 1 1 2 1 1 AN X iaoj ing , Q IAN Gu isheng , WAN G Changzheng , X IA Junbo , DAN G Tao , L IAO W ei ( In stitute of R e sp iratory D isease s, 2 D ep artm en t of Cardiova scu lar D isea ses, X inqiao Ho sp ital, Th ird M ilitary M edical Un iversity, Chongqing 400037 , Ch ina) 　　A b stract: O bje c tive 　To con struct a eukaryotic exp re ssion vector con tain ing mou se IDO gen