复式PCR检测间日疟原虫和恶性疟原虫的现场应用.pdf

1005-6661(2012)03-0298-05 复式PCR检测间日疟原虫和恶性疟原虫 的现场应用 顾亚萍1周华云1 曾俊1朱国鼎1陶志勇2刘耀宝1朱韩武3 [摘要]目的 探讨复式PCR方法在疟疾诊断中的现场应用价值。方法 根据疟原虫18SrRNA基因序列，合成疟原虫 属特异性上游引物和间日疟原虫、恶性疟原虫种特异性下游引物，优化PCR反应体系，建立在同一PCR反应体系中同时检 测问日疟原虫、恶性疟原虫基因组特异性DNA片段的疟疾诊断方法，并评价其现场应用价值。结果 间日疟原虫和恶性 疟原虫基因组DNA经过复式PCR后，分别扩增出1451bp和833bp的特异性条带，而伯氏疟原虫、食蟹猴疟原虫及健康人 血样均无扩增带出现，用该反应体系可检出原虫血症为1.1×10-6和5.6x10-7的间日疟原虫和恶性疟原虫感染。与镜检法相 比，复式PCR检测119份现场样本，112份与镜检结果相同，阳性率为54％，漏诊率为0.8％，误诊率为0，而镜检法依次分别 为53％、1.7％和3.4％。结论 复式PCR方法检测疟原虫具有简便、快速、特异、敏感等优点，在疑似病例的鉴别诊断和分 子流行病学调查中具有良好的应用价值。 恶性疟原虫；间日疟原虫；复式PCR；现场应用 R382.31 A FieldapplicationofmultiplexPCRtodistinguishPlasmodiumvivaxandPlas modiumfalciparum GUYa-ping ZHOUHua-yunCAOJunZHUGuo-dingTAOZhi-yongLIUYao-bao ZHUHan-wu 江苏省卫生厅科研项目(X200734) 1江苏省血吸虫病防治研究所、卫生部寄生虫病预防 与控制技术重点实验室(无锡214064);；2蚌埠医学院 病原生物学教研室；3湖南省郴州市疾病预防控制中 心 顾亚萍，女，主管医师。研究方向：疟疾防治与研究 稀释度的疟原虫血样本，电泳结果显示，当间日疟原 检测，具有广泛应用价值。 SchistoControl ·301· J 2012，V01．24，No．3 中国血吸虫病防治杂志2012年第24卷第3期Chin 表1 复式PCR与镜检法对现场样本检测效果的比较 Table1 between examinationand PCRon samples efficacy microscopic o咖叩棚概ofdetection multiple—x trial—blood 性，又有种的特异性的特点，选择疟原虫的属特异性 讨 论 引物作为共同的上游引物，间日疟和恶性疟原虫的种 特异性引物分别作为下游引物，采用3条引物替代4 疟疾是一种严重危害人体健康的寄生虫病。江 条引物扩增2个靶片断来降低引物间的相互影响，提 苏省曾是疟疾高流行地区，经过几十年的防治，疟疾 高扩增效率。本研究选用Kho等bl报道合成的3条(2 流行得到有效控制，并且已从控制走向消除。然而， 对)引物用于扩增间日疟原虫、恶性疟原虫特异性 随着经济的发展和国际交往的增多，近年来，我省到 DNA片段，并对反应体系进行优化以适用于现场应 非洲和东南亚等地劳务输出逐年增加，导致输入性疟 用。并且采用该反应体系对119例现场滤纸血样本 疾逐渐增多n‘91，这些病例大多数在国外感染疟疾后 进行检测，112份与镜检结果相同。对l例镜检为恶 得不到规范治疗，回国后又再燃，给疟疾的诊断、控