基因调控.ppt

基因表达与调控 基因概念及其发展 原核生物基因调控：操纵元模型 真核生物基因调控： 　　　DNA、转录和翻译三个水平 第二节 基因的调控 一种生物的整套遗传密码可以比作一本密码字典 ? 该种生物的每个细胞中都有这本字典。 为什么基因只有在它应该发挥作用的细胞内和应该发挥作用的时间才能呈现活化状态? 结论：必然有一个基因调控系统在发挥作用。 基因调控主要在三个水平上进行： DNA水平； 转录水平； 翻译水平。 一 原核生物的基因调控 （一）转录水平的调控： 负调控：细胞中阻遏物阻止基因转录过程的调控机制。 阻遏物与DNA分子结合 ? 阻碍RNA聚合酶转录 ? 使基因处于关闭状态； 正调控：经诱导物诱导转录的调控机制。 　　诱导物通常与蛋白质 结合 ? 形成一种激活子 复合物 ? 与基因启动子 DNA 序列结合? 激活基 因起始转录 ? 使基因处 于表达的状态。 正调控与负调控并非互相排斥的两种机制，而是生物体适应环境的需要，有的系统既有正调控又有负调控； 原核生物以负调控为主，真核生物以正调控为主； 降解代谢途径中既有正调控又有负调控；合成代谢途径中一般以负调控来控制产物自身的合成。 乳糖操纵元（操纵子）： 1.　乳糖操纵元模型： 1961年，雅各布（Jacob F.）和莫诺（Monod J.）的操纵元模型： 操纵元：细菌的主要基因调控单位，也就是转录单位。 如：大肠杆菌乳糖代谢的调控需要三种酶参加： ?-半乳糖酶：将乳糖分解成半乳糖和葡萄糖； 渗透酶：增加糖的渗透，易于摄取乳糖和半乳糖； 转乙酰酶： ?-半乳糖转变成乙酰半乳糖。 大量乳糖时：大肠杆菌三种酶的数量急剧增加，几分钟即可达到千倍以上，这三种酶能够成比例地增加； 乳糖消耗完：这三种酶的合成也即同时停止。 2. 乳糖操纵元的负调控： ①. 乳糖操纵元组成部分； ②. 野生型基因型（I+O+Z+Y+A+）, 无乳糖时，基因不表达； ③. 野生型基因型（I+O+Z+Y+A+）, 　有乳糖时，基因表达； ④. 抑制基因突变（I－O+Z+Y+A+）, 　无乳糖时，基因组成型表达； ⑤. 操纵基因突变型（I＋OcZ+Y+A+） 　无乳糖时，基因组成型表达。 3. 乳糖操纵元的正调控： 当有乳糖存在时，操纵子开启，基因进行表达。 当既有大量半乳糖又有葡萄糖时，基因表达将会怎样？ 基因不表达，存在新的调节因子来控制乳糖操纵子开启，这个因子的活性与葡萄糖有关。 葡萄糖可使腺苷酸环化酶活性降低；而腺苷酸环化酶能将ATP转变成cAmP。 cAmP又与代谢激活蛋白（catabolite activating protein, 　CAP）结合?形成cAmP-CAP复合物，作为lac操纵子正调控因子。当cAmP-CAP复合物二聚体插入到lac特异启动子序列时?使DNA构型发生变化，而RNA聚酶与该新构型的DNA结合紧密，转录效率高。 葡萄糖抑制操纵子的原理： 葡萄糖　?　腺苷酸环化酶活性降低　?　ATP无法转变成cAmP　?　不能形成CAP-cAmP复合蛋白　?　RNA酶无法结合在DNA上　?　基因不表达。 4. 乳糖操纵元存在的遗传证据： ⑴. 遗传分析的三个基本假定： 阻遏基因的产物是可以在细胞中扩散的反式调控元件； 操纵子Ｏ是调控位点， 不编码蛋白； Ｏ位点需紧邻受其控 制的结构基因，是顺 式调控元件；通过 产生局部二倍体， 可以进行遗传验证。 ⑵. 阻遏蛋白的分离与鉴定： 吉尔伯特（Gilbert W., 1966）等利用阻遏蛋白超量表达突变型（regulator Quantity，Iq）?分离出阻遏蛋白； ①. IPTG 诱导Iq细胞，分离提取阻遏蛋白，用含有同位素标记的IPTG溶液透析，透析袋内外浓度不一样 ? 提取物中含有与IPTG结合的物质，纯化分析证明具有蛋白特性。 ②. 沉降分析： IPTG阻遏蛋白复合物?lacO+序列： DNA沉降系数为40S； IPTG阻遏蛋白复合物：沉降系数为7S； IPTG阻遏蛋白复合物（同位素标记）? DNA序列：超速梯度沉降分析有同位标记的沉降系数为40S。 ③. 序列特异结合： 阻遏蛋白只与正常的乳糖操纵子（lac O）序列结合，而不与lacOc 的序列结合。 ⑶. 蛋白的结晶分析： 　　刘毅斯（Lewis M.， 1996）等成功地测定了 阻遏蛋白的晶体结构， 与诱