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2015-09-25 发布于重庆
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CELⅠ酶的粗提取及其活性检测

遗传 HEREDITAS (Beijing) 28(9): 1112~1116, 2006 技术与方法 CEL Ⅰ酶的粗提取及其活性检测韩锁义, 杨玛丽, 盖钧镒, 喻德跃 (南京农业大学大豆研究所/ 国家大豆改良中心/作物遗传与种质创新国家重点实验室, 南京 210095) 摘要: CEL Ⅰ酶是第一个从真核生物中提取的用于高效特异切割DNA 双链碱基错配和 DNA 扭曲的内切酶, 因而也是 TILLING 技术中用到的一种关键酶。文章对 CEL Ⅰ酶的粗提取及其活性检测进行了研究。错配切割实验表明, CEL Ⅰ酶在包含有G→A 点突变的杂合双链中, 能有效地在错配位点进行切割, 并可以通过 ABI377 测序仪获得直观的检测结果, 从而可以用于 TILLING 分析。关键词: CEL Ⅰ酶; TILLING; 点突变; 活性中图分类号: Q55 文献标识码: A 文章编号: 0253-9772(2006)09-1112-05 Crude Extraction and Activity Assay of CEL Ⅰ HAN Suo-Yi, YANG Ma-Li, GAI Jun-Yi, YU De-Yue (Soybean Research Institute, Nanjing Agricultural University ; National Center for Soybean Improvement , Ministry of Agriculture ; National Key Laboratory of Crop Genetics and Germplasm Enhancement , Nanjing 210095, China) Abstract: CEL Ⅰ, extracted from celery, is the first known eukaryotic nuclease that cleaves DNA with high specificity at sites of base-substitution mismatch and DNA distortion. It is a key enzyme for TILLING research. Here we reported a crude extraction method and activity assay of CEL Ⅰ. Incision at mismatches of single nucleotide suggested that CEL Ⅰ can effectively detect DNA at G →A base substitution and the result can be obtained from an ABI377 Sequencer. Therefore, the extracted enzyme can be used in TILLING. Key words: CEL Ⅰ enzyme; TILLING; point mutations; activity 随着多个物种基因组序列数据的增加, 在基因组物的变